弓形蟲(chóng)感染妊娠中期小鼠對(duì)胎盤損傷作用的探討.pdf_第1頁(yè)
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1、目的:采用妊娠中期BALB/c小鼠作為動(dòng)物模型,觀察:①弓形蟲(chóng)感染妊娠中期小鼠后,是否影響孕鼠的健康和胎鼠的生長(zhǎng)發(fā)育;②感染后孕鼠血清中絨毛膜促性腺激素、胎盤催乳素和雌三醇的含量是否受到影響;③感染后蟲(chóng)體是否侵入孕鼠胎盤組織,造成胎盤組織病理性損傷;④感染后是否影響胎盤細(xì)胞的凋亡及凋亡相關(guān)蛋白Bax、Bcl-2、Fas、FasL、TNF—α的表達(dá)。通過(guò)以上實(shí)驗(yàn),從胎盤結(jié)構(gòu)、功能和內(nèi)分泌角度,來(lái)較系統(tǒng)地分析和推導(dǎo)弓形蟲(chóng)感染妊娠中期宿主出現(xiàn)

2、不良妊娠的機(jī)制。 方法:將40只妊娠中期小鼠隨機(jī)分為感染組和正常對(duì)照組,每組20只。在妊娠第8天,感染組經(jīng)腹腔無(wú)菌接種純化的弓形蟲(chóng)速殖子懸液(100個(gè)速殖子/0.2mlPBS/只);正常對(duì)照組注射等量無(wú)菌PBS(0.01mol/L,pH=7.4)。觀察孕鼠的健康狀況,于妊娠第12、14、16、18天隨機(jī)、分批取感染組和正常對(duì)照組孕鼠各5只,摘眼球取血,收集血清,頸椎脫臼處死,分離胎盤和胎鼠。①解剖顯微鏡下觀察胎鼠存活情況,電子天

3、平稱量胎盤和胎鼠的重量,游標(biāo)卡尺測(cè)量胎鼠的體長(zhǎng)和尾長(zhǎng);②放射免疫分析法測(cè)定孕鼠血清中絨毛膜促性腺激素、胎盤催乳素和雌三醇的含量;③瑞姬氏染色觀察腹腔液、羊水和胎盤組織中是否有弓形蟲(chóng)存在,蘇木素—伊紅(HE)染色觀察胎盤組織的病理?yè)p傷情況;④流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)胎盤細(xì)胞凋亡率,分光光度法測(cè)定胎盤組織半胱天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)酶的活性;⑤免疫組織化學(xué)法檢測(cè)胎盤組織中細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白Bax、Bcl-2、Fas、FasL及TNF—

4、α的表達(dá)量。 結(jié)果:①正常對(duì)照組孕鼠無(wú)異常體征,隨著妊娠天數(shù)的增加,胎盤重量先增后減,胎盤系數(shù)逐步降低,胎鼠重量、體長(zhǎng)和尾長(zhǎng)不斷增加;感染組孕鼠隨著妊娠天數(shù)的增加,體重逐漸降低,出現(xiàn)豎毛、倦怠、采食量減少等異常表現(xiàn),并有流產(chǎn)現(xiàn)象,死胎和吸收胎明顯增多。組內(nèi)不同妊娠天數(shù)的比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(胎盤重量:F正常對(duì)照組=88.610、F感染組=21.906,胎鼠重量:F正常對(duì)照組=1695.874、F感染組=284.801,胎盤系

5、數(shù):F正常對(duì)照組=165.930、F感染組=100.011,胎鼠體長(zhǎng):F正常對(duì)照組=649.255、t感染組=5.391,胎鼠尾長(zhǎng):F正常對(duì)照組=503.761、t感染組=6.267;P<0.001);組間相同妊娠天數(shù)的比較,第12天的胎盤系數(shù),第14、16天的胎盤、胎鼠重量和胎鼠尾長(zhǎng),第16天的胎鼠體長(zhǎng),感染組均低于正常對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。②放射免疫測(cè)定顯示:感染組和正常對(duì)照組孕鼠血清絨毛膜促性腺激素的含量均隨著

6、妊娠天數(shù)的增加而降低,但在妊娠第18天時(shí),正常對(duì)照組有輕微的升高;胎盤催乳素和雌三醇的含量均隨著妊娠天數(shù)的增加而升高,但在妊娠第18天時(shí),感染組有輕微的降低。組內(nèi)不同妊娠天數(shù)的比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(絨毛膜促性腺激素:F正常對(duì)照組=19.306、F感染組=57.620,胎盤催乳素:F正常對(duì)照組=17.449、F感染組=46.720,雌三醇:F正常對(duì)照組=239.546、F感染組=22.841;P<0.001);組間相同妊娠天數(shù)的比較,

7、三種激素的含量感染組均低于正常對(duì)照組,但僅妊娠第16天和第18天的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。③瑞姬氏染色和HE染色顯示:感染組孕鼠妊娠第12天的腹腔液、羊水和胎盤組織中均未見(jiàn)弓形蟲(chóng),病理?yè)p傷不明顯;妊娠第14天的腹腔液和羊水中可見(jiàn)弓形蟲(chóng)速殖子,但胎盤組織中未見(jiàn)蟲(chóng)體,可見(jiàn)淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞侵潤(rùn),偶見(jiàn)凋亡小體;妊娠第16天的腹腔液和羊水中速殖子數(shù)目明顯增多,并有假包囊,胎盤組織中也有速殖子,可見(jiàn)部分滋養(yǎng)細(xì)胞破壞,胎盤絨

8、毛出現(xiàn)炎性改變;到妊娠第18天,蟲(chóng)體數(shù)目進(jìn)一步增多,胎盤絨毛血管減少,滋養(yǎng)層細(xì)胞縮小,胞漿濃縮,核質(zhì)致密,可見(jiàn)大量的凋亡小體。④細(xì)胞凋亡檢測(cè)顯示:感染組和正常對(duì)照組孕鼠胎盤細(xì)胞凋亡率及Caspase-3酶的活力單位均隨著妊娠天數(shù)的增加而升高。組內(nèi)不同妊娠天數(shù)的比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(細(xì)胞凋亡率:F正常對(duì)照組=114.333、F感染組=200.417,Caspase-3酶的活力單位:F正常對(duì)照組=14.940、F感染組=15.212;P

9、<0.01);組間相同妊娠天數(shù)的比較,感染組孕鼠胎盤細(xì)胞凋亡率及酶活力單位均高于正常對(duì)照組,除妊娠第18天的胎盤Caspase-3酶活力單位外,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。⑤免疫組化檢測(cè)顯示:感染組和正常對(duì)照組孕鼠胎盤組織中的細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白Bax、Bcl-2、Fas、FasL及 TNF—α在胎盤絨毛和蛻膜中均有表達(dá),以合體滋養(yǎng)細(xì)胞表達(dá)較多。感染組和正常對(duì)照組孕鼠Bax、Fas、FasL及TNF—α的表達(dá)量均隨著妊娠天數(shù)的增加而

10、增加,Bcl-2的表達(dá)量均隨著妊娠天數(shù)的增加而減少。組內(nèi)不同妊娠天數(shù)的比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Bax:F正常對(duì)照組=387.316、F感染組=76.059,Bcl-2:F正常對(duì)照組=255.026、F感染組=552.733,F(xiàn)as:F正常對(duì)照組=591.607、F感染組=1131.261,F(xiàn)asL:F正常對(duì)照組=82.598、F感染組=159.749,TNF—α:F正常對(duì)照組=74.774、F感染組=105.678;P=0.000);

11、組間相同妊娠天數(shù)的比較,感染組孕鼠Bax、Fas、FasL及TNF—α的表達(dá)量均高于正常對(duì)照組,Bcl-2的表達(dá)量均低于正常對(duì)照組。除妊娠第12天的TNF—α,第14天和第16天的Bax和Bcl-2外,表達(dá)量差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 結(jié)論:①弓形蟲(chóng)感染妊娠中期小鼠,蟲(chóng)體可能先在腹腔中大量繁殖,再擴(kuò)散至羊水和胎盤組織,經(jīng)口感染和經(jīng)血液傳播致先天性弓形蟲(chóng)病的發(fā)生。②弓形蟲(chóng)感染妊娠中期小鼠,蟲(chóng)體侵入胎盤組織,可致胎盤絨毛

12、血管減少,部分滋養(yǎng)細(xì)胞破壞,絨毛出現(xiàn)炎性病理改變,影響胎盤對(duì)胚胎所需營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的轉(zhuǎn)運(yùn)。③弓形蟲(chóng)感染妊娠中期小鼠,可致胎盤組織中的細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白Bax、Fas、FasL及TNF—α表達(dá)量增加,Bcl-2表達(dá)量減少,啟動(dòng)內(nèi)、外源性的細(xì)胞凋亡途徑,激活凋亡效應(yīng)酶Caspase-3,使胎盤細(xì)胞凋亡增加,進(jìn)而使滋養(yǎng)細(xì)胞浸潤(rùn)子宮蛻膜及子宮螺旋小動(dòng)脈的能力下降,以致胎盤血管網(wǎng)形成不良和螺旋小動(dòng)脈重鑄過(guò)程受阻,致使胎盤低灌注、缺氧、缺血。④胎盤的完整性

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