體內(nèi)外研究弓形蟲(chóng)對(duì)小鼠脂肪細(xì)胞的感染及胰島素在體外對(duì)弓形蟲(chóng)生長(zhǎng)發(fā)育的影響.pdf

1、弓形蟲(chóng)(Toxoplasmagondii)是細(xì)胞內(nèi)寄生的單細(xì)胞原生生物，它可以感染所有溫血?jiǎng)游锛叭祟?lèi)。弓形蟲(chóng)病是由弓形蟲(chóng)引起的一種人畜共患病，呈世界性分布。感染弓形蟲(chóng)后引起多種臨床癥狀如精神病、流產(chǎn)、畸胎和智力障礙。此外，弓形蟲(chóng)也是引起免疫缺陷如AIDS和長(zhǎng)期使用免疫抑制劑病人死亡的重要病原體。據(jù)估計(jì)，全世界有三分之一的人感染弓形蟲(chóng)。弓形蟲(chóng)的生活史十分繁雜，貓是其終末宿主，而其他溫血?jiǎng)游锇ㄈ藙t是弓形蟲(chóng)重要的中間宿主。弓形蟲(chóng)可以感染哺乳

2、動(dòng)物所有的有核細(xì)胞并造成破壞。 3T3-L1細(xì)胞是小鼠的一種前脂肪細(xì)胞，在一定條件下經(jīng)過(guò)誘導(dǎo)，可分化成脂肪細(xì)胞。3T3-L1在分化過(guò)程中，氨基脲敏感胺氧化酶(semicarbazide-sensitiveamineoxidase，SSAO)表達(dá)量急劇上升，一周左右細(xì)胞分化成熟，SSAO表達(dá)量達(dá)到高峰。SSAO是一種單胺氧化酶系，活性基團(tuán)位于細(xì)胞膜表面的外側(cè)，該酶可催化外源性和內(nèi)源性單胺化合物的氧化脫氨作用。單胺化合物如甲胺是該酶

3、的內(nèi)源性底物，該底物被氧化分解后產(chǎn)生甲醛、過(guò)氧化氫等產(chǎn)物。甲醛具有強(qiáng)烈的細(xì)胞毒作用，使低密度脂蛋白過(guò)氧化。在動(dòng)脈粥樣硬化和某些糖尿病的形成和發(fā)展過(guò)程中，甲醛可能起著主要的作用。 本論文以3T3-L1細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，研究其分化成脂肪?xì)胞的過(guò)程中SSAO的活性、該酶氧化分解底物甲胺的產(chǎn)物對(duì)弓形蟲(chóng)感染脂肪細(xì)胞及對(duì)其中增殖的影響。結(jié)果顯示，3T3-L1細(xì)胞分化成脂肪細(xì)胞后表達(dá)大量的SSAO，分化后的3T3-L1細(xì)胞在10-4～10-3m

4、ol/L濃度的內(nèi)源性底物甲胺存在的情況下，SSAO氧化分解甲胺產(chǎn)生的甲醛和過(guò)氧化氫等對(duì)弓形蟲(chóng)具有一定的毒性作用，直接影響到弓形蟲(chóng)對(duì)細(xì)胞的感染率。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)底物本身對(duì)弓形蟲(chóng)的細(xì)胞感染活性并沒(méi)有明顯的影響，甲醛和過(guò)氧化氫對(duì)弓形蟲(chóng)感染細(xì)胞毒性作用的半數(shù)致死劑量(TCID50)分別是3.5×10-7mol/L和4.5×10-4mol/L。論文同時(shí)研究了弓形蟲(chóng)在脂肪細(xì)胞內(nèi)的增殖情況，發(fā)現(xiàn)脂肪細(xì)胞在不同濃度的SSAO底物甲胺存在下，弓形蟲(chóng)在感染細(xì)胞內(nèi)

5、的生長(zhǎng)率與細(xì)胞感染量具有正相關(guān)性。這說(shuō)明弓形蟲(chóng)一旦感染細(xì)胞后，細(xì)胞內(nèi)環(huán)境對(duì)其生長(zhǎng)發(fā)育起關(guān)鍵作用。 3T3-L1細(xì)胞在分化過(guò)程中SSAO的活力迅速增加，SSAO的生理底物甲胺被氧化分解后產(chǎn)生的甲醛、過(guò)氧化氫等高活性物質(zhì)，對(duì)弓形蟲(chóng)感染細(xì)胞具有毒性作用，能明顯影響其對(duì)細(xì)胞的感染率。這預(yù)示著SSAO作為一種具有生理活性的酶，由于其內(nèi)源性底物的存在，它的過(guò)量表達(dá)對(duì)于人類(lèi)的健康將造成潛在的威脅。 體內(nèi)實(shí)驗(yàn)以SPF級(jí)昆明鼠為研究對(duì)象，

6、通過(guò)腹腔和脂肪組織注射兩種途徑感染弓形蟲(chóng)后檢測(cè)弓形蟲(chóng)對(duì)脂肪組織和其它組織器官的感染情況。實(shí)驗(yàn)采用組織切片，HE染色法、免疫組織化學(xué)法并結(jié)合PCR等方法，研究小鼠感染弓形蟲(chóng)6天后脂肪組織，以及肝、脾、肺、和腦等臟器組織的病理狀況及弓形蟲(chóng)的分布情況。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，盡管弓形蟲(chóng)對(duì)脂肪組織以外的器官具有明顯的易感性，但脂肪細(xì)胞可能不是弓形蟲(chóng)的易感宿主細(xì)胞， 通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)研究不同濃度胰島素及D-葡萄糖對(duì)弓形蟲(chóng)在3T3-L1細(xì)胞內(nèi)分裂增殖