體內(nèi)外研究弓形蟲對小鼠脂肪細(xì)胞的感染及胰島素在體外對弓形蟲生長發(fā)育的影響.pdf

1、弓形蟲(Toxoplasmagondii)是細(xì)胞內(nèi)寄生的單細(xì)胞原生生物，它可以感染所有溫血動物及人類。弓形蟲病是由弓形蟲引起的一種人畜共患病，呈世界性分布。感染弓形蟲后引起多種臨床癥狀如精神病、流產(chǎn)、畸胎和智力障礙。此外，弓形蟲也是引起免疫缺陷如AIDS和長期使用免疫抑制劑病人死亡的重要病原體。據(jù)估計(jì)，全世界有三分之一的人感染弓形蟲。弓形蟲的生活史十分繁雜，貓是其終末宿主，而其他溫血動物包括人則是弓形蟲重要的中間宿主。弓形蟲可以感染哺乳

2、動物所有的有核細(xì)胞并造成破壞。 3T3-L1細(xì)胞是小鼠的一種前脂肪細(xì)胞，在一定條件下經(jīng)過誘導(dǎo)，可分化成脂肪細(xì)胞。3T3-L1在分化過程中，氨基脲敏感胺氧化酶(semicarbazide-sensitiveamineoxidase，SSAO)表達(dá)量急劇上升，一周左右細(xì)胞分化成熟，SSAO表達(dá)量達(dá)到高峰。SSAO是一種單胺氧化酶系，活性基團(tuán)位于細(xì)胞膜表面的外側(cè)，該酶可催化外源性和內(nèi)源性單胺化合物的氧化脫氨作用。單胺化合物如甲胺是該酶

3、的內(nèi)源性底物，該底物被氧化分解后產(chǎn)生甲醛、過氧化氫等產(chǎn)物。甲醛具有強(qiáng)烈的細(xì)胞毒作用，使低密度脂蛋白過氧化。在動脈粥樣硬化和某些糖尿病的形成和發(fā)展過程中，甲醛可能起著主要的作用。 本論文以3T3-L1細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ停芯科浞只芍炯?xì)胞的過程中SSAO的活性、該酶氧化分解底物甲胺的產(chǎn)物對弓形蟲感染脂肪細(xì)胞及對其中增殖的影響。結(jié)果顯示，3T3-L1細(xì)胞分化成脂肪細(xì)胞后表達(dá)大量的SSAO，分化后的3T3-L1細(xì)胞在10-4～10-3m

4、ol/L濃度的內(nèi)源性底物甲胺存在的情況下，SSAO氧化分解甲胺產(chǎn)生的甲醛和過氧化氫等對弓形蟲具有一定的毒性作用，直接影響到弓形蟲對細(xì)胞的感染率。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)底物本身對弓形蟲的細(xì)胞感染活性并沒有明顯的影響，甲醛和過氧化氫對弓形蟲感染細(xì)胞毒性作用的半數(shù)致死劑量(TCID50)分別是3.5×10-7mol/L和4.5×10-4mol/L。論文同時研究了弓形蟲在脂肪細(xì)胞內(nèi)的增殖情況，發(fā)現(xiàn)脂肪細(xì)胞在不同濃度的SSAO底物甲胺存在下，弓形蟲在感染細(xì)胞內(nèi)

5、的生長率與細(xì)胞感染量具有正相關(guān)性。這說明弓形蟲一旦感染細(xì)胞后，細(xì)胞內(nèi)環(huán)境對其生長發(fā)育起關(guān)鍵作用。 3T3-L1細(xì)胞在分化過程中SSAO的活力迅速增加，SSAO的生理底物甲胺被氧化分解后產(chǎn)生的甲醛、過氧化氫等高活性物質(zhì)，對弓形蟲感染細(xì)胞具有毒性作用，能明顯影響其對細(xì)胞的感染率。這預(yù)示著SSAO作為一種具有生理活性的酶，由于其內(nèi)源性底物的存在，它的過量表達(dá)對于人類的健康將造成潛在的威脅。 體內(nèi)實(shí)驗(yàn)以SPF級昆明鼠為研究對象，

6、通過腹腔和脂肪組織注射兩種途徑感染弓形蟲后檢測弓形蟲對脂肪組織和其它組織器官的感染情況。實(shí)驗(yàn)采用組織切片，HE染色法、免疫組織化學(xué)法并結(jié)合PCR等方法，研究小鼠感染弓形蟲6天后脂肪組織，以及肝、脾、肺、和腦等臟器組織的病理狀況及弓形蟲的分布情況。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，盡管弓形蟲對脂肪組織以外的器官具有明顯的易感性，但脂肪細(xì)胞可能不是弓形蟲的易感宿主細(xì)胞， 通過細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)研究不同濃度胰島素及D-葡萄糖對弓形蟲在3T3-L1細(xì)胞內(nèi)分裂增殖