Th17細(xì)胞在弓形蟲感染小鼠中的免疫病理作用研究.pdf

1、目的：建立弓形蟲RH株速殖子感染BALB/c小鼠動物模型，研究弓形蟲感染小鼠后體內(nèi)Th17細(xì)胞和相關(guān)細(xì)胞因子的變化，探討Th17細(xì)胞在弓形蟲感染中的免疫病理作用。
　　方法：77只正常BALB/c小鼠隨機分為感染組65只，正常對照組12只。感染組小鼠腹腔內(nèi)注射弓形蟲速殖子（1.0×104/ml,0.5ml/只），對照組以等量生理鹽水同法注射。感染后每天觀察小鼠發(fā)病情況，取發(fā)病小鼠腹腔液分離鑒定弓形蟲速殖子。另取小鼠肝、脾和肺組織進(jìn)

2、行常規(guī)病理學(xué)檢查，用免疫熒光法檢測各組織中弓形蟲抗原，經(jīng)PCR擴(kuò)增各組織中弓形蟲核酸確定感染模型建立成功。感染后每12小時處死感染組小鼠5只，收集其脾細(xì)胞和血清，采用PE-IL-17 McAb、PE-Cy5-CD3 McAb及 FITC-CD4 McAb進(jìn)行細(xì)胞染色后應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測 Th17細(xì)胞，ELISA法檢測小鼠血清中細(xì)胞因子IL-17、IL-6以及抗弓形蟲特異性IgM抗體的動態(tài)變化。另收集正常小鼠的脾細(xì)胞和血清同法檢測Th17

3、細(xì)胞及相關(guān)細(xì)胞因子。
　　結(jié)果：
　　1、BALB/c小鼠感染弓形蟲速殖子后4-5天開始發(fā)病表現(xiàn)為食欲減退、聳毛、閉目、活動減少，部分小鼠出現(xiàn)腹瀉，6-7天死亡。小鼠腹腔液經(jīng)Giemsa染色可見呈新月形或香蕉形弓形蟲速殖子。
　　2、病理檢查感染小鼠肝臟損害較明顯，表現(xiàn)為肝細(xì)胞液化壞死、水變性，炎細(xì)胞浸潤及肝細(xì)胞再生；肺臟出現(xiàn)肺水腫，支氣管粘膜及肺間質(zhì)炎性細(xì)胞浸潤；脾臟無明顯病理損傷。
　　3、免疫熒光法檢測感染

4、小鼠肝、脾和肺組織中弓形蟲抗原的分布，各組織內(nèi)均可見特異性綠色熒光，尤以肝臟分布較明顯。
　　4、用PCR法擴(kuò)增弓形蟲速殖子B1基因部分片段，在感染小鼠外周血、肝臟、脾臟、肺和腹腔液中均擴(kuò)增得到特異性目的條帶。
　　5、ELISA法檢測感染小鼠體內(nèi)抗弓形蟲特異性IgM抗體在12h至96h均在正常水平上下波動，在108h-132h開始上升且高于正常水平，與正常組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　6、流式細(xì)胞術(shù)檢測感染小鼠脾臟

5、中CD3+CD4+IL-17+Th17細(xì)胞在感染后12h顯著增高，與正常對照組比較具有統(tǒng)計學(xué)意義，24h至60h有所下降但仍高于正常水平，72h至96h下降至最低水平，與正常小鼠比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　7、ELISA法檢測IL-17在小鼠感染后12h至36h升高，與正常對照比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義，48h至144h于正常水平上下波動；IL-6在12h至48h與正常對照比較含量無明顯改變，60h至72h降至最低，84h至132h上升