大黃黃連瀉心湯化學成分分析與藥動學研究.pdf

1、大黃黃連瀉心湯是《傷寒論》中收錄的治療“心下痞”證的著名方劑，后世對其組方中除大黃和黃連外是否還配伍有黃芩一直存在爭議，嚴重制約了對該復方進一步的繼承和發(fā)揚。本研究擬以化學成分的變化為主線，系統(tǒng)研究該復方配伍黃芩前后的化學成分及其溶出變化規(guī)律；在此基礎上，研究復方的不同配伍中主要化學成分小檗堿在大鼠體內(nèi)的藥動學特征，為揭示大黃黃連瀉心湯組方本相提供實驗數(shù)據(jù)參考。
　　 一、大黃在煎煮與浸漬過程中蒽醌類成分的含量變化比較研究

2、>　　 為了比較大黃黃連瀉心湯浸漬法與傳統(tǒng)湯劑煎煮法的區(qū)別，本研究采用HPLC法測定并比較復方中君藥大黃在不同處理方法(浸漬法和煎煮法)和在不同時間點的湯劑中游離蒽醌、結(jié)合蒽醌和總蒽醌的含量。結(jié)果表明，本研究所建立的HPLC方法可很好的用于大黃中蒽醌類成分的分析；大黃經(jīng)煎煮法處理后湯劑中游離蒽醌和結(jié)合蒽醌的溶出量比經(jīng)浸漬法處理的樣品含量明顯要高；游離蒽醌類成分在兩種處理方法中的溶出率隨時間變化基本穩(wěn)定，結(jié)合蒽醌類成分在煎煮和浸漬過程中

3、有所下降。本研究表明，采用浸漬法的大黃中的蒽醌類成分明顯比煎煮法的低，這可能導致復方瀉下的作用減弱。
　　 二、大黃黃連瀉心湯不同配伍浸漬劑中蒽醌類成分的變化研究
　　 大黃黃連瀉心湯組方中除大黃和黃連外，是否還應配伍有黃芩始終是爭議的焦點，本研究以復方中君藥大黃所含的蒽醌類成分為研究對象，分析該復方有無配伍黃芩對蒽醌類成分的影響。結(jié)果表明，本研究建立的HPLC方法可用于大黃黃連瀉心湯復方配伍黃芩時蒽醌類成分的分析；大黃

4、與黃連或黃芩配伍時蒽醌類成分變化明顯，有無配伍黃芩對蒽醌類成分含量有顯著影響。
　　 三、大黃黃連瀉心湯不同配伍浸漬劑中主要化學成分的變化研究
　　 為了全面分析大黃黃連瀉心湯有無配伍黃芩時對浸漬劑中主要化學成分的影響，本研究采用HPLC-UV法，以乙腈-0.5％三乙胺(磷酸調(diào)節(jié)pH至3.5)為流動相，Luna苯基柱為色譜柱，建立了同時測定復方中大黃蒽醌類成分、黃連生物堿成分和黃芩黃酮類成分的共9個主要化學成分的方法，并

5、分析了該復方在配伍黃芩前后浸漬劑中這些成分的變化。結(jié)果表明，本研究建立的方法可用于該復方中9個主要成分的分析；大黃黃連瀉心湯配伍黃芩后浸漬劑中大黃蒽醌類成分明顯增加，黃連生物堿中小檗堿含量明顯減少；配伍黃芩將對該復方中的主要化學成分含量產(chǎn)生明顯影響。
　　 四、大黃黃連瀉心湯不同配伍浸漬劑中主要化學成分的歸屬與鑒定
　　 為了進一步研究復方配伍黃芩后是否有新化合物產(chǎn)生，并對復方中的主要化學成分進行歸屬和鑒定，本研究建立了

6、大黃黃連瀉心湯中主要化學成分的HPLC-DAD分析方法，對該復方中各藥味的浸漬劑和不同藥味配伍浸漬劑中的化學成分，通過比較各色譜峰與對照品的保留時間和吸收光譜，并結(jié)合LC/MS/MS提供的色譜峰質(zhì)譜信息進行相關色譜峰的鑒定和歸屬研究。結(jié)果表明，本研究所建立的HPLC方法可對該復方中的主要化學成分進行分析；在HPLC圖譜中共標出了20個主要色譜峰，結(jié)合對照品對其中的11個化學成分進行了鑒定和來源歸屬；此外，對某些化學成分進行HPLC分離和

7、LC/MS/MS定性，結(jié)合相關文獻推斷出了非洲防已堿、表小檗堿、黃連堿和漢黃芩苷等4個成分，并判斷了它們的歸屬；對復方中15個色譜峰進行的定性和歸屬研究結(jié)果為揭示該復方的物質(zhì)基礎、配伍規(guī)律和質(zhì)量控制提供實驗數(shù)據(jù)支持。
　　 五、大黃黃連瀉心湯不同配伍浸漬劑中小檗堿在大鼠體內(nèi)的藥動學研究
　　 大黃黃連瀉心湯配伍黃芩后浸漬劑中化學成分發(fā)生了明顯變化，這些變化必然會導致體內(nèi)藥動學的變化，本研究建立了大鼠血漿中小檗堿的含量測定

8、方法，對復方不同配伍浸漬劑中小檗堿的藥動學進行比較分析。大鼠隨機分成4組，分別灌胃給予小檗堿原料藥，單味黃連浸漬劑凍干粉，黃連黃芩浸漬劑凍干粉，大黃黃連凍干粉和大黃黃連黃芩凍干粉，于給藥后不同時間點采集血樣，血漿經(jīng)處理后采用建立的HPLC法測定其中的小檗堿濃度，結(jié)合WinNonlin軟件采用非房室模型計算藥動學參數(shù)，比較組間差異。結(jié)果表明，大黃黃連瀉心湯組的Cmax最高；大黃黃連黃芩組的AUC0-∞數(shù)值最高；黃連組和小檗堿組的Cmax和

9、AUC0-∞數(shù)值相比較低，且藥時曲線存在多峰現(xiàn)象；黃連黃芩組這兩個數(shù)值最小。大黃黃連瀉心湯(大黃+黃連)中的大黃可能促進小檗堿的吸收，同時促使其消除加快；黃芩的存在可能嚴重阻礙了黃連中小檗堿的吸收。本研究從單個有效成分藥動學的變化來嘗試揭示復方的配伍規(guī)律，為復方的后續(xù)體內(nèi)研究提供了方法學借鑒，也為解決復方組方的爭議提供了一定的參考。
　　 以上研究結(jié)果表明，大黃黃連瀉心湯配伍黃芩后，浸漬劑中的主要化學成分發(fā)生明顯的變化，大黃蒽醌