復(fù)方當(dāng)歸注射液對(duì)柴油機(jī)尾氣顆粒物損傷后雌鼠生殖細(xì)胞的干預(yù)研究.pdf

1、目的： 通過(guò)建立柴油機(jī)尾氣顆粒物染毒小鼠動(dòng)物模型，觀察、分析柴油機(jī)尾氣顆粒物（DEP）對(duì)卵母細(xì)胞發(fā)育進(jìn)程的影響，初步闡明其作用機(jī)理，評(píng)價(jià)柴油機(jī)尾氣顆粒物所致雌性生殖毒性的情況；在確定柴油機(jī)尾氣顆粒物導(dǎo)致小鼠卵母細(xì)胞損傷的基礎(chǔ)上，展開(kāi)關(guān)于復(fù)方當(dāng)歸注射液對(duì)其可能的防治作用及作用機(jī)制研究，為中藥制劑在生殖功能保護(hù)方面的臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)，促進(jìn)中醫(yī)藥的推廣應(yīng)用。 方法： 以273只21天齡健康ICR小雌鼠為研究對(duì)象。分

2、13組，除空白對(duì)照組和空白治療組外，DEP模型組（分為低、中、高劑量三個(gè)濃度）、DEP模型對(duì)照治療組（DEP中、高劑量）、中劑量模型+中藥低劑量組、中劑量模型+中藥中劑量組、中劑量模型+中藥高劑量組、高劑量模型+中藥低劑量組、高劑量模型+中藥中劑量組、高劑量模型+中藥高劑量組共11組。自21天齡至31天齡采用移液槍向小雌鼠咽后壁滴入柴油機(jī)尾氣顆粒物（俄亥俄州立大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院提供，已知主要成分和粒徑大?。覞嵋?，每三天一次，共10天。對(duì)

3、于中藥治療組，在染毒后分別對(duì)治療組腹腔注射5g生藥/kg·d、10g生藥/kg·d和20 g生藥/kg·d復(fù)方當(dāng)歸注射液，空白治療組、DEP模型對(duì)照治療組（DEP中、高劑量）腹腔注射生理鹽水0．3ml/10g·d。觀察小鼠的一般情況、體重增長(zhǎng)情況、卵巢濕重以及臟器系數(shù)；電鏡下觀察小鼠卵母細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)：測(cè)定卵巢組織勻漿中超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、還原型谷胱甘肽（GSH）含量；采用卵母細(xì)胞體內(nèi)成熟、體外受精的方法觀察DEP

4、對(duì)小鼠卵母細(xì)胞成熟的影響；應(yīng)用實(shí)時(shí)PCR技術(shù)檢測(cè)卵母細(xì)胞線粒體DNA（mtDNA）成分情況。 結(jié)果： 模型組： 1．各組間小鼠體重變化無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0．05）。卵巢濕重及卵巢臟器系數(shù)DEP的中、高劑量染毒組與對(duì)照組、DEP的低劑量組比較有顯著降低（P<0．05）； 2．電鏡下觀察可見(jiàn)：DEP的中、高劑量染毒組卵母細(xì)胞大部分線粒體腫脹及空泡化，而DEP的低劑量組卵母細(xì)胞結(jié)構(gòu)無(wú)改變； 3．DEP的

5、中、高劑量染毒組小鼠卵巢組織中SOD含量、GSH含量顯著降低，MDA含量顯著升高（P<0．05）； 4．各染毒組對(duì)卵母細(xì)胞生發(fā)泡破裂沒(méi)有影響，DEP的中、高劑量染毒組均可以明顯地降低小鼠體內(nèi)（0 h）卵母細(xì)胞第一極體釋放率（P<0．01）及增高卵母細(xì)胞退化率（P<0．01）。在受精24h后總體外受精率和培養(yǎng)48h后2-細(xì)胞以上胚胎卵裂率與對(duì)照組、DEP的低劑量組相比下降極顯著（P<0．01）； 5．與對(duì)照組比較，DEP3

6、．0ug/ul組和DEP12．0ug/ul組小鼠卵母細(xì)胞mtDNA的拷貝數(shù)（轉(zhuǎn)化成對(duì)數(shù)后）與對(duì)照組、DEP0．8ug/ul組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0．01）。 復(fù)方當(dāng)歸中藥治療組：DEP染毒的小鼠上述情況均有不同程度改善，具體表現(xiàn)為： 1．各組間小鼠體重變化無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0．05）。復(fù)方當(dāng)歸高劑量治療組的卵巢濕重及卵巢臟器系數(shù)與相應(yīng)劑量DEP的模型組比較有顯著升高（P>0．01）； 2．電鏡下觀察可見(jiàn)：復(fù)

7、方當(dāng)歸高劑量治療組卵母細(xì)胞大部分線粒體腫脹及空泡化程度有所改善； 3．復(fù)方當(dāng)歸高劑量治療組小鼠卵巢組織中SOD含量、GSH含量顯著升高，MDA含量顯著降低（P<0．05）； 4．各染毒組對(duì)卵母細(xì)胞生發(fā)泡破裂沒(méi)有影響，復(fù)方當(dāng)歸高劑量治療組均可以明顯地增加小鼠體內(nèi)（0 h）卵母細(xì)胞第一極體釋放率（P<0．01）及降低卵母細(xì)胞退化率（P<0．01）。在受精24h后總體外受精率和培養(yǎng)48h后2-細(xì)胞以上胚胎卵裂率與相應(yīng)劑量DEP

8、的模型組相比升高極顯著（P<0．01）； 5．小鼠卵母細(xì)胞mtDNA的拷貝數(shù)（轉(zhuǎn)化成對(duì)數(shù)后），復(fù)方當(dāng)歸高劑量治療組與相應(yīng)劑量DEP的模型組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0．01）。 結(jié)論： 1．本研究成功制作急性接觸柴油機(jī)尾氣顆粒損傷動(dòng)物模型，有利于研究DEP、復(fù)方當(dāng)歸注射液對(duì)女性生殖系統(tǒng)的作用。 2．DEP具有生殖毒性，可對(duì)卵巢及卵母細(xì)胞均造成不同程度的損傷；同時(shí)小鼠體外受精情況隨DEP的含量的增加而減少

9、，由此可推斷DEP暴露對(duì)受孕有一定危害作用。 3．從中醫(yī)病因?qū)W來(lái)看，DEP這種環(huán)境污染致病因素可以看作一種“外邪”，作為一種致病因子直接損傷個(gè)體，造成臟腑生理功能的紊亂和臟腑氣血的失調(diào)，損及沖任，導(dǎo)致生殖功能障礙。 4．中藥能干預(yù)DEP的毒性，復(fù)方當(dāng)歸注射能對(duì)DEP所造成小鼠內(nèi)生殖器和卵母細(xì)胞的損傷有一定的拮抗和緩解作用，達(dá)到“扶正驅(qū)邪”的效果。由此推斷在DEP暴露的防治中適當(dāng)應(yīng)用復(fù)方當(dāng)歸注射液具有一定可行性，為中藥制劑