用DNA芯片鑒定水稻花器官發(fā)育相關(guān)基因.pdf

1、突變體是研究水稻花器官發(fā)育的一種良好的實驗材料。目前已發(fā)現(xiàn)的水稻花器官突變體還很少，已克隆的與水稻花器官發(fā)育相關(guān)的基因大多數(shù)是采用同源克隆方法分離的。我們利用輻射誘變方法，在日本晴中發(fā)現(xiàn)了一個水稻花器官發(fā)育的突變體psd2。psd2植株營養(yǎng)生長正常，與野生型植株同步進入生殖發(fā)育，但其穎花外型比正常穎花明顯膨大，雄蕊原基和雌蕊原基不分化，產(chǎn)生多重內(nèi)外稃結(jié)構(gòu)。本研究室已經(jīng)證明，psd2的突變性狀是由一個基因的隱性突變引起的，并對該基因(記為

2、PSD2)進行了精細定位，確定了候選基因。從突變表現(xiàn)看，PSD2應是水稻雌雄蕊發(fā)育的關(guān)鍵基因。該基因的突變，有可能會引起一系列與水稻花器官發(fā)育相關(guān)的基因的表達改變。因此，本研究利用cDNA微陣列，對psd2突變體和野生型在雌雄蕊發(fā)育過程中差異表達的基因進行了鑒定，以期找出其它與水稻花器官發(fā)育相關(guān)的基因，為深入剖析水稻花器官發(fā)育的基因網(wǎng)絡奠定基礎。 取雌、雄蕊形成期的psd2突變體和野生型水稻莖尖2～10毫米長的幼穗，提取總RNA

3、，進行cDNA微陣列雜交。接著進行芯片掃描，芯片數(shù)據(jù)的提取和分析。按照在采用“psd2+Cy3/PSD2+Cy5”染料標記方法的cDNA微陣列實驗中Ratio≥2，且在采用“psd2+Cy5/PSD2+Cy3”染料標記方法的Ratio＞1的標準，我們在psd2中檢測到36個差異表達基因，其中24個表達上調(diào)，12個表達下調(diào)。因此，我們通過cDNA微陣列鑒定，篩選到了36個花器官發(fā)育相關(guān)基因。 對這36個相關(guān)基因進行進一步分析發(fā)現(xiàn)：