Er-YAG激光聯(lián)合根管沖洗劑對根尖外多細菌生物膜的殺菌作用研究.pdf

1、根管治療術(shù)是牙髓病與根尖周病最常用的臨床治療方法，然而由于多樣的感染細菌、復(fù)雜的根管系統(tǒng)和不當(dāng)操作等原因，使得一些患牙經(jīng)過反復(fù)治療仍然遷延不愈，即成為所謂的頑固性根尖周炎。而形成頑固性根尖周炎的主要原因就是在其患牙根尖形成了根尖外的生物膜。
　　根尖外生物膜是細菌粘附于根尖牙骨質(zhì)上形成的細菌群落，由多種細菌鑲嵌于蛋白質(zhì)和多糖的基質(zhì)中形成。根尖外生物膜中的細菌以革蘭氏陽性厭氧菌或兼性厭氧菌為主，比如糞腸球菌、衣氏放線菌、血鏈球菌等等

2、。其中糞腸球菌是根尖病變中最常被檢出的細菌，含有脂磷壁酸、溶細胞素、肽聚糖等多種毒力因子導(dǎo)致炎癥的產(chǎn)生，并且能夠促進生物膜的形成，使細菌具有更強的致病性并且難以被去除。衣氏放線菌可能與慢性根尖炎癥有關(guān)，導(dǎo)致竇道產(chǎn)生。血鏈球菌也常在根尖部檢出，能夠造成根管的持續(xù)感染。而生物膜的形成更能夠延緩抗菌素的擴散，增強細菌的耐藥性，使細菌更難以殺滅；同時也使得細菌的毒性產(chǎn)物更易聚集，提高細菌毒性。因此在治療頑固性根尖周炎的過程中如何有效得去除根尖周

3、的生物膜變得尤為重要。
　　臨床上治療頑固性根尖周炎最常用的方法是進行根尖切除術(shù)。根尖切除術(shù)是一種根管外科手術(shù)，主要應(yīng)用于傳統(tǒng)根管治療術(shù)無法治愈的情況下，用手術(shù)的手段清除根尖外的生物膜和感染組織，阻斷炎癥來源，從而達到消除癥狀，保存患牙的目的。要達到這一目的，要合理設(shè)計手術(shù)切口；刮除病變組織、根尖外細菌以及超充材料，保證感染去除；切除根尖3mm,再對根尖處進行倒預(yù)備，根尖倒充填來封閉根管系統(tǒng)。然而進行根尖切除就必定會導(dǎo)致牙根長度的

4、減少，使得牙根的支持力下降，尤其不適用于牙周炎患者，以及要做后期修復(fù)治療的患者。因此考慮利用其它方法，在不進行根尖切除的情況下去除根尖外生物膜，達到治愈患牙的效果。
　　Er：YAG激光自其應(yīng)用于牙體組織開始，就因熱損傷小、能精確切割、減少出血、有抗菌能力等優(yōu)點而被廣泛應(yīng)用。研究發(fā)現(xiàn)，Er：YAG激光對于根管內(nèi)包括糞腸球菌在內(nèi)的細菌都具有很好的殺滅作用。尤其是當(dāng)其與根管沖洗液聯(lián)合應(yīng)用的時候，激光激發(fā)沖洗液產(chǎn)生空氣泡沫和脈沖壓力波，

5、進一步發(fā)揮激光和沖洗液的殺菌效果，能夠有效去除根尖和牙本質(zhì)小管內(nèi)的細菌。同時Er：YAG還能夠減少細菌毒素在牙骨質(zhì)中的擴散，抑制生物膜的再生。然而國內(nèi)外對于Er：YAG激光聯(lián)合根管沖洗劑在根尖外的應(yīng)用研究還很少。因此，本文考慮在體外建立多細菌生物膜，以Er：YAG激光聯(lián)合多種根管沖洗液進行處理，觀察細菌形態(tài)和數(shù)量的改變，為Er：YAG激光應(yīng)用于根尖外生物膜做參考。
　　一、多細菌生物膜在牛牙骨質(zhì)片上的形成過程研究
　　選擇糞

6、腸球菌、血鏈球菌以及衣氏放線菌作為研究細菌，通過繪制它們的生長曲線，確定在牙骨質(zhì)片上進行細菌接種的順序。將牛牙牙根切開，切下牙根表面的牙骨質(zhì)，形成牙骨質(zhì)片，消毒后接種細菌。先接種衣氏放線菌培養(yǎng)48h后，再接種另外兩種細菌進行共同培養(yǎng)。并在培養(yǎng)期間，每天拿取一個牙骨質(zhì)片樣本用掃描電子顯微鏡（SEM）觀察，確定選擇的細菌確實可以在體外牛牙骨質(zhì)片上形成生物膜，并且了解這種生物膜的形成過程，以及生物膜成熟所需要的培養(yǎng)時間。
　　二、Er:

7、YAG激光聯(lián)合幾種根管沖洗劑對體外多細菌生物膜作用的掃描電子顯微鏡觀察
　　根據(jù)實驗一的研究建立體外根尖多細菌生物膜模型。選用幾種具有消毒作用的沖洗劑：次氯酸鈉（sodium hypochlorite，NaClO）、洗必泰（chlorhexidine，CHX）以及強酸性電解質(zhì)水（strong acid electrolyzed water，SAEW）。將牙骨質(zhì)片樣本隨機分為四個實驗組和兩個對照組。四個實驗組分別為A(5.25％ N

8、aClO/Er：YAG)、B(0.5%NaClO/Er：YAG)、C(2% CHX/Er：YAG)和D(SAEW/Er：YAG)，E（生理鹽水）和F（5.25% NaClO）分別為陰性對照組和陽性對照組。每組又分為三個亞組，即處理時間分別為30s、1min和3min。按分組進行相應(yīng)處理后用4%的多聚甲醛固定樣本12h，然后用30%、50%、70%、80%、90%的乙醇溶液脫水一次各15min，100%酒精脫水兩次每次15min。待樣本干

9、燥后噴金，用SEM進行觀察。結(jié)果發(fā)現(xiàn)除了生理鹽水組之外，其他各組的細菌的數(shù)量以及形態(tài)都發(fā)生了變化，但不同組間的變化程度有所不同。提示 Er:YAG激光與幾種根管沖洗劑聯(lián)合對于根尖外生物膜有殺菌作用，但效果與根管沖洗劑的種類以及作用時間有關(guān)。
　　三、Er:YAG激光聯(lián)合幾種根管沖洗劑對體外多細菌生物膜的細菌定量研究
　　在實驗二的基礎(chǔ)上，具體研究各組細菌數(shù)量的變化情況，對處理組的殺菌效果進行定量分析。提取糞腸球菌的DNA，進

10、行普通PCR、瓊脂糖凝膠電泳、切膠、膠回收，回收所得的DNA片段作為實時熒光定量PCR的標(biāo)準(zhǔn)品，制作細菌的標(biāo)準(zhǔn)曲線。同時提取各樣本上經(jīng)處理后的DNA，進行實時熒光定量，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線確定各組處理后所余細菌的數(shù)量。結(jié)果表明5.25% NaClO+Er:YAG組在30s和3min時與陽性對照組的效果相當(dāng)，而在1min時效果優(yōu)于5.25%NaClO組。而0.5% NaClO+Er:YAG組和SAEW+Er:YAG組雖然30s時殺菌效果略次于5.