柑橘體細(xì)胞融合創(chuàng)制三倍體無核新種質(zhì)及融合再生植株的遺傳鑒定.pdf

1、柑橘在我國農(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)上具有重要地位，柑橘的優(yōu)質(zhì)豐產(chǎn)是其在國際柑橘市場上的核心競爭力。無核一直是柑橘育種追求的目標(biāo)性狀。細(xì)胞融合技術(shù)，為柑橘無核育種提供了一條快捷的途徑，即通過融合單倍體(n)原生質(zhì)體與二倍體(2n)原生質(zhì)體獲得三倍體。基于這一思路，本研究利用‘早金’甜橙單倍體愈傷系與其它6個二倍體有核柑橘品種的葉肉或愈傷親本融合，旨在獲得綜合雙親優(yōu)點(diǎn)的三倍體新種質(zhì)。另外，本研究采用SSR分子標(biāo)記對實(shí)驗(yàn)室前期獲得的一批融合再生植株進(jìn)行了倍性

2、和遺傳分析。主要研究結(jié)果如下:
　　1.單倍體愈傷原生質(zhì)體+二倍體葉肉原生質(zhì)體融合創(chuàng)制三倍體。以‘早金’甜橙單倍體愈傷系Fa為親本，分別與6個二倍體種間良種的葉肉原生質(zhì)體融合。各組合融合產(chǎn)物在后期培養(yǎng)過程中均逐漸死亡，經(jīng)多次（每個組合至少3次）嘗試都未再生成功，表明單倍體愈傷原生質(zhì)體與二倍體葉肉原生質(zhì)體融合較難再生。
　　2.單倍體愈傷原生質(zhì)體+二倍體愈傷原生質(zhì)體融合創(chuàng)制三倍體。分別以‘早金’甜橙單倍體愈傷系Fa、Ec為親本

3、，與‘默科特’橘橙(MCK)愈傷組織原生質(zhì)體融合，得到Fa+MCK組合的再生愈傷組織，倍性測定為二倍體與四倍體的混倍體，得到Ec+ MCK組合的再生愈傷組織、胚狀體，倍性測定為五倍體。
　　3.3個組合融合產(chǎn)物的再生與倍性分析。本研究對實(shí)驗(yàn)室前期留下的G1+‘卡特’夏橙、G1+‘Itabori’甜橙、G1+‘默科特’橘橙三個組合的融合產(chǎn)物進(jìn)行后續(xù)培養(yǎng)，最終分別成功獲得G1+‘卡特’夏橙、G1+‘Itabori’甜橙、G1+‘默科特

4、’橘橙再生植株31株、14株、4株。經(jīng)流式細(xì)胞儀倍性檢測，3個組合的所有再生植株均為四倍體。
　　4.3個組合再生植株的遺傳鑒定。采用SSR分子標(biāo)記，分別對G1+‘卡特’夏橙、G1+‘Itabori’甜橙、G1+‘默科特’橘橙3個組合的再生植株進(jìn)行胞質(zhì)基因組、核基因組的遺傳來源鑒定，結(jié)果表明:3個組合的再生植株都為四倍體體細(xì)胞雜種，其核基因組來源于兩方親本，同時可能發(fā)生了一定程度的重組交換，G1+‘卡特’夏橙、G1+‘Itabor