嗅覺剝奪誘導(dǎo)觸覺功能上調(diào)和抑制性神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)的可塑性.pdf

1、目的：建立嗅覺剝奪誘導(dǎo)觸覺功能上調(diào)和大腦桶狀皮層（barrel cortex）GABA能神經(jīng)元形態(tài)和功能改變的實驗動物模型，研究跨感覺模式可塑性的機(jī)理，尤其是抑制性神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)在神經(jīng)可塑性中的作用。
　　方法：選用出生后12天和30天FVB-Tg（Gad GFP)4570Swn/J小鼠，予氯仿40ul滴入小鼠一側(cè)鼻腔破壞一側(cè)嗅覺，分別于嗅覺剝奪后1周和3周，取腦組織對barrel cortexGABA能神經(jīng)元進(jìn)行形態(tài)和功能檢測。

2、>　　1．以戊巴比妥鈉麻醉，4％多聚甲醛心臟灌流固定，取腦放于4％多聚甲醛溶液固定，做成40μm連續(xù)楔形切片。切片放入反應(yīng)液進(jìn)行細(xì)胞色素氧化酶染色和尼氏復(fù)染，在光學(xué)顯微鏡下觀察細(xì)胞色素氧化酶高活性神經(jīng)元分布區(qū)域并進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)。部分切片直接在共聚焦顯微鏡下觀察綠色熒光蛋白標(biāo)記的GABA能神經(jīng)元的形態(tài)結(jié)構(gòu)。
　　2．選用生后12天FVB-Tg（Gad GFP)4570Swn/J小鼠，在嗅覺剝奪后1周用異氟烷吸入麻醉，迅速將大腦分離，做

3、冠狀切片（400μm）。將腦片放置于充分氧合的25?C人工腦脊液中，孵育1-2小時后轉(zhuǎn)移至灌流槽，然后放入31?C人工腦脊液中，以2ml/min的速度灌流腦片。運用Axoclamp-2B放大器全細(xì)胞記錄模式記錄GABA能神經(jīng)元動作電位的閾電位和不應(yīng)期；用Clamp9軟件分析群集發(fā)放的動作電位間距和動作電位峰時程標(biāo)準(zhǔn)差。
　　結(jié)果：與對照組相比，嗅覺剝奪使得barrel cortex細(xì)胞色素氧化酶高活性神經(jīng)元的數(shù)量增加(P<0.05