觸須感覺(jué)信息輸入減少誘導(dǎo)桶狀皮層錐體神經(jīng)元和GABAergic神經(jīng)元功能的可塑性.pdf

1、目的：建立小鼠觸須感覺(jué)信息輸入減少的動(dòng)物模型，分析觸須感覺(jué)信息輸入減少后，桶狀皮層（Barrel Cortex）錐體神經(jīng)元和GABA能神經(jīng)元內(nèi)在特性和神經(jīng)元群集發(fā)放動(dòng)作電位編碼功能的變化，探討神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)功能的可塑性機(jī)制。
　　方法：1.小鼠觸須感覺(jué)信息輸入減少模型的建立：將FVB-Tg（Gad GFP）4570Swn/J小鼠右側(cè)嘴角部全部觸須修剪至小于1mm，每24小時(shí)修剪一次，從出生后7天開(kāi)始修剪持續(xù)到出生后17天。
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2、.在上述處理10天以后，應(yīng)用T迷宮實(shí)驗(yàn)檢測(cè)小鼠嗅覺(jué)功能變化，實(shí)驗(yàn)中小鼠移動(dòng)到食物一側(cè)的成功率作為鑒別其嗅覺(jué)功能上調(diào)的指標(biāo)。
　　3.膜片鉗電生理實(shí)驗(yàn)：取出生1周后小鼠，連續(xù)造模后10天，用異氟烷吸入麻醉，迅速將大腦分離，做冠狀切片（400μm），然后將腦片置于氧合的人工腦脊液(ASCF)中，25?C下孵育1-2小時(shí)后轉(zhuǎn)移至灌流槽，在31?C下對(duì)腦片進(jìn)行灌流；采用IR-DIC光學(xué)顯微鏡(Nikon E600FN)熒光顯微鏡定位大腦桶

3、狀皮層綠色熒光蛋白標(biāo)記的GABA能神經(jīng)元和錐體神經(jīng)元；運(yùn)用Axoclamp-200B放大器，電流鉗模式全細(xì)胞記錄方法記錄大腦桶狀皮層GABA能神經(jīng)元和錐體神經(jīng)元的動(dòng)作電位，測(cè)量其發(fā)放容量及閾電位(threshold potentials, Vts)，電壓鉗模式全細(xì)胞記錄方法采集GABA能神經(jīng)元sIPSCs（自發(fā)性抑制性突觸后電流）包括電流間距（Interval of Events， IE）和電流幅度（Amplitude）數(shù)據(jù)，信號(hào)數(shù)據(jù)輸

4、入Clampex10.1進(jìn)行處理分析。結(jié)果：1.造模組小鼠對(duì)食物的正確選擇成功率明顯高于正常組小鼠；2.應(yīng)用膜片鉗方法，電流鉗模式實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與正常組相比，造模組桶狀皮層錐體神經(jīng)元群集發(fā)放動(dòng)作電位的發(fā)放容量顯著增加，動(dòng)作電位間距ISI縮短(P<0.05)，閾電位(Vts)降低(P<0.05)；GABA能神經(jīng)元群集發(fā)放動(dòng)作電位的發(fā)放容量顯著降低，動(dòng)作電位間距 ISI延長(zhǎng)(P<0.05)，閾電位(Vts)升高(P<0.05)；3.電壓鉗模