補陽還五湯對局灶性腦缺血大鼠外源性神經(jīng)干細胞存活、分化的影響.pdf

1、目的：探討異體神經(jīng)干細胞移植對腦缺血的治療作用及其自身成活與分化情況，并從炎癥反應探討補陽還五湯對移植細胞成活、分化的影響。 方法： 1．采用機械分離方法從新生wastar大鼠腦內獲得海馬神經(jīng)干細胞，并用Brdu標記，觀察其標記情況。 2．采用MCAO法復制大鼠局灶性腦缺血模型，隨機分組，分別通過不同途徑移植Brdu標記神經(jīng)干細胞，觀察移植細胞成活、分化及動物死亡情況。 3．復制大鼠局灶性腦缺血模型，隨機

2、分為模型組、空白移植組、單純移植組和中藥聯(lián)合干細胞移植組，分別給予不同處理，于移植后7、14、21天進行神經(jīng)功能評價，細胞存活和分化情況觀察。 4．采用RT-PCR和ELIsA方法于移植后1、7、14檢測模型組、單純移植組，中藥聯(lián)合干細胞移植組腦組織ICAM-1、TNF-α基因和蛋白的表達水平。 結果： 1．經(jīng)尾靜脈、側腦室、海馬移植神經(jīng)干細胞均可移行入大腦，經(jīng)側腦室細胞成活最多，經(jīng)尾靜脈細胞成活最少，而經(jīng)海馬移

3、植成活細胞介于兩者之間，但死亡動物最多。 2．海馬神經(jīng)干細胞短時間暴露于Brdu可較好地標記，并可整合于子代細胞。 3．經(jīng)側腦室移植神經(jīng)干細胞可提高缺血大鼠神經(jīng)功能、細胞的成活并分化，在第7、14、21天Brdu陽性細胞分別為(20.3±12)、(25.4±0.8)、(26.7±1.0)個/mm<'2>，Brdu<'+>/NF<,200><'+>陽性細胞分別為(5.3±0.8)、(7.3±0.6)、(8.2±0.9)個/

4、mm<'2>，動物給予補陽還五湯后，第7、14、21天Brdu陽性細胞分別為(20.4±0.8)、(28.8±1.3)、(30.1±1.6)個/mm<'2>，Brdu<'+>/NF<,200><'+>陽性細胞分別為(5.8±0.6)、(9.1±1.0)、(10.9±0.8)個/mm<'2>，兩組在14、21天差異有顯著性，P<0.05或0.01。聯(lián)合補陽還五湯可促進神經(jīng)功能恢復，兩組在14、21天差異有顯著性，且神經(jīng)功能積分與新生神經(jīng)元

5、之間有直線相關性。在模型組、空白移植組未見Brdu、Brdu/NF200陽性細胞。 4.在正常腦組織有低水平的ICAM-1、TNF-α基因和蛋白表達，缺血后增強，但隨時間延長逐漸下降。干細胞移植后可引起急性炎癥反應，ICAM-1基因和蛋白表達水平上調，TNF-α基因和蛋白水平表達上調。在1、14、21d ICAM-1基因和蛋白水平分別為(1.42±0.08)、(1.14±0.10)、(0.98±0.05)和(73.91±7.3)

6、、(56.93±7.0)、(41.25±6.3)ng/mg，TNF-α基因和蛋白水平分別為(1.13±0.12)、(0.98±0.08)、(0.82±0.11)和(43.7±4.58)、(28.16±5.11)、(19.73±4.11)μg/mg。聯(lián)合補陽還五湯治療后ICAM-1基因和蛋白水平分別為(1.13±0.12)、(0.92±0.08)、(0.83±0.07)和(72.09±6.8)、(50.88±6.9)、(36.73±5.6

7、)ng/mg，TNF-α基因和蛋白水平分別為(1.04±0.10)、(0.77±0.12)、(0.62±0.08)和(44.30±5.08)、(25.38±4.78)、(15.33±3.98)μg/mg，兩組在7，14d差異有顯著性，P<0.05或P0.01。 結論： 1.經(jīng)側腦室移植是有效的移植途徑。 2.神經(jīng)干細胞移植能在缺血腦內存活分化為神經(jīng)元，并促進神經(jīng)功能恢復，聯(lián)合補陽還五湯能促進移植細胞成活與分化。