補陽還五湯對腦缺血再灌注大鼠的保護作用及對AKT蛋白表達的影響.pdf

1、[目的]：
　　1.觀察補陽還五湯對急性腦缺血再灌注損傷大鼠腦組織的血液流變學(xué)、組織病理學(xué)的變化、大鼠血小板活化因子PAF及大鼠血小板活化標志物CD62p、CD63的表達變化情況。
　　2.探討補陽還五湯對急性腦缺血再灌注損傷大鼠腦組織Phospho-Akt/Akt蛋白表達的影響，分析其腦缺血再灌注損傷的保護機制的關(guān)系。
　　[方法]：
　　1.將雌雄各半的100只SPF級SD大鼠隨機分為假手術(shù)組、模型組、氯吡格

2、雷組、補陽還五湯高、低劑量組，每組20只。氯吡格雷組，補陽還五湯高，低劑量組分別按照動物體表面積換算，灌胃給予氯吡格雷6.8mg·kg-1·d-1，補陽還五湯26，6.5g·kg-1·d-1，其余各組給予蒸餾水。
　　2.連續(xù)給藥14天后，采用雙側(cè)頸總動脈阻斷誘導(dǎo)的大鼠急性腦缺血再灌注模型，分別觀察補陽還五湯高、低劑量對該模型全血粘度的變化，PAF的含量變化情況及腦組織病理改變情況。
　　3.采用Elisa法檢測細胞因子CD

3、62p、CD63表達變化情況，以確定補陽還五湯抑制血小板活化的作用。
　　4.采用IHC（免疫組化）觀察腦組織和血小板中PI3K/Akt介導(dǎo)的血小板活化通路中Phospho-Akt; Akt蛋白表達的影響。
　　5.采用qRT-PCR觀察腦組織中PI3K/Akt介導(dǎo)的血小板活化通路中總Akt基因表達的變化，進一步確定補陽還五湯對該活化通路的調(diào)控靶位基因。
　　[結(jié)果]：
　　1.補陽還五湯對全血粘度的影響:與假手

4、術(shù)組相比，模型組的全血粘度顯著增加，并且在切變率為150 s-1、30 s-1、10 s-1時有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.01)。與模型組相比，氯吡格雷和中藥補陽還五湯組均能明顯降低全血粘度。補陽還五湯高劑量組在切變率為30 s-1、10 s-1，低劑量組在切變率150 s-1、30 s-1、10 S-1時均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　2.補陽還五湯對腦缺血再灌注組織病理學(xué)的影響:HE染色結(jié)果顯示，模型組海馬CA1區(qū)細胞明顯減少

5、，細胞排列紊亂，無層次感，細胞核固縮深染，形成空泡，說明造模成功。假手術(shù)組海馬CA1區(qū)神經(jīng)細胞形態(tài)正常，結(jié)構(gòu)完整，排列層次分明，細胞間質(zhì)之間致密;與模型組比較，補陽還五湯高低劑量組和陽性對照組多數(shù)神經(jīng)細胞結(jié)構(gòu)完整，細胞形態(tài)改變相對較輕，核固縮少，且補陽還五湯對腦損傷的改善程度的量效關(guān)系明顯。
　　3.補陽還五湯對PAF、CD62P、CD63的影響:與假手術(shù)組比較，模型組的PAF、CD62p、CD63含量明顯增加(P＜0.05)，與

6、模型組比較，氯吡格雷和補陽還五湯高低劑量組均能明顯降低血清PAF、CD62P、CD63含量，且隨劑量增大而效果逐漸加強。
　　4.補陽還五湯對PI3K/Akt介導(dǎo)的血小板活化通路中Phospho-Akt(Ser473); Akt(Ser473)蛋白的表達的影響:免疫組化結(jié)果顯示，氯吡格雷組和補陽還五湯高劑量組皮層AKT(Ser473)和p-AKT(Ser473)的陽性表達率較模型組有顯著升高(P＜0.05);與模型組比較，氯吡格雷

7、組、補陽還五湯各劑量組AKT磷酸化率明顯增加(P＜0.05)。觀察海馬CA1區(qū)可知， AKT(Ser473)和p-AKT(Ser473)在氯吡格雷組和補陽還五湯組陽性表達較為明顯。與模型組比較，補陽還五湯高劑量組AKT磷酸化率明顯增加(P＜0.05)。
　　5.補陽還五湯對PI3K/Akt介導(dǎo)的血小板活化通路中總AKT基因表達的變化情況:qRT-PCR結(jié)果顯示，與假手術(shù)組比較，模型組總的AKT基因表達上升，并且有顯著性差異(P＜0

8、.05);與模型組比較，氯吡格雷組、補陽還五湯各劑量組總AKT基因表達明顯降低(P＜0.05)。
　　[結(jié)論]：
　　1.補陽還五湯對急性腦缺血再灌注損傷有保護作用，其機制可能與其能顯著性降低急性腦缺血再灌注損傷大鼠的全血粘度，改善腦組織病理學(xué)損傷，并且補陽還五湯能明顯降低血清PAF、CD62P、CD63含量有關(guān)。
　　2.補陽還五湯對急性腦缺血再灌注損傷大鼠的腦保護作用機制可能與PI3K/AKT信號通路中AKT的表達