高壓氧對(duì)局灶性腦缺血再灌注成年大鼠海馬齒狀回神經(jīng)干細(xì)胞增殖遷移分化的影響.pdf

1、目的:
　　利用高壓氧在不同時(shí)間對(duì)局灶性腦缺血再灌注成年大鼠進(jìn)行干預(yù),觀察海馬齒狀回神經(jīng)干細(xì)胞增殖遷移及分化,探討高壓氧對(duì)局灶性腦缺血神經(jīng)發(fā)生的影響。
　　方法:
　　60只成年SD大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組、高壓氧組、高壓空氣組、常壓氧組。每組隨機(jī)分為2天、3天、7天和14天四個(gè)亞組,每個(gè)亞組各3只。大腦中動(dòng)脈栓塞再灌注(transient middle artery occlusion,tMCAO),栓塞80分鐘

2、后再灌注,栓塞2h后各治療組動(dòng)物開(kāi)始治療。高壓氧組(2.5ATA,100％氧氣,60min),高壓空氣組(2.5ATA,空氣,60min),常壓氧組(常壓,100%氧氣,60min),各組動(dòng)物接受治療每天1次,直到相應(yīng)治療時(shí)間結(jié)束。模型組和假手術(shù)組不接受任何治療。手術(shù)第1,2天腹腔內(nèi)注射BrdU標(biāo)記增殖的細(xì)胞,于第一次治療后標(biāo)記,隔4小時(shí)一次,每天3次,連續(xù)2天。治療結(jié)束后利用免疫組化熒光雙重標(biāo)記技術(shù)標(biāo)記大腦雙側(cè)海馬齒狀回顆粒下區(qū)(SG

3、Z)增殖細(xì)胞及其表型。熒光顯微鏡觀察每側(cè)SGZ隨機(jī)5個(gè)視野,計(jì)數(shù)各類熒光雙標(biāo)細(xì)胞數(shù)。共聚焦顯微鏡拍照。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用多組均數(shù)比較的方差分析,多重比較用SNK-q檢驗(yàn),方差不齊用Dunnett’s T3檢驗(yàn)。
　　結(jié)果:
　　1.增殖的神經(jīng)干細(xì)胞數(shù)(BrdU+/nestin+):高壓氧組與其他四組在第2天(患側(cè)),3天(患側(cè)),7天(雙側(cè))相比均有顯著差異(P<0.05),且多于其他各組。高壓氧組的患側(cè)在第3天,增殖的神經(jīng)干細(xì)

4、胞數(shù)最多,第7天顯著下降。第14天各組增殖的細(xì)胞(BrdU+)均未共表達(dá)神經(jīng)干細(xì)胞標(biāo)記物nestin,表明在第14天增殖的細(xì)胞已經(jīng)經(jīng)歷分化。
　　2.增殖細(xì)胞分化為非成熟神經(jīng)元(BrdU+/DCX+)細(xì)胞數(shù):高壓氧組在第2天(健側(cè)),3天(患側(cè)),7天和14天(雙側(cè))與其他四組相比均有顯著差異(P<0.05),且高壓氧組多于其他各組。高壓氧在第7天達(dá)高峰,第14天下降。
　　3.增殖細(xì)胞分化為神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞(BrdU+/GFA

5、P+)細(xì)胞數(shù):高壓氧組在第2天,14天(患側(cè))和各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的健側(cè)與其他四組比較均無(wú)明顯差異。假手術(shù)組的患側(cè)第3天(P<0.05),高壓空氣組的患側(cè)第7天(P<0.05)與其他四組比較有顯著差異,均高于其他四組。高壓氧在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)分化為神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的數(shù)目與其余四組相比均不增多。
　　結(jié)論:
　　高壓氧治療能顯著提高腦缺血再灌注的成年大鼠海馬齒狀回顆粒下區(qū)(SGZ)神經(jīng)干細(xì)胞增殖并向神經(jīng)元方向分化遷移進(jìn)入顆粒細(xì)胞層最終成為成熟顆