非HIF-1途徑介導HL-60細胞VEGF表達變化分子機制的研究.pdf

1、目的:惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展與腫瘤新生血管形成有直接的關系。血管新生在腫瘤的生長、發(fā)展及轉(zhuǎn)移過程中起著重要的作用。正常情況下，機體內(nèi)促血管新生因子與血管新生抑制因子處于—平衡狀態(tài)，當發(fā)生腫瘤性增殖時，促血管新生因子的分泌增加，導致血管內(nèi)皮細胞增殖，新生血管形成，為不斷增殖的腫瘤細胞提供氧氣及營養(yǎng)成分。在目前已知的促血管生成因子中，血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF)是作用最強、特異性最高的一種因子，在腫瘤血管形成中起著重要作用。以往的研究主要

2、集中于實體瘤，但最近的研究發(fā)現(xiàn)，在血液系統(tǒng)惡性腫瘤如白血病、多發(fā)性骨髓瘤患者中也存在著血管新生現(xiàn)象。同時還發(fā)現(xiàn)低氧誘導因子(HIF-1α)是在特異性低氧狀態(tài)下發(fā)揮活性的轉(zhuǎn)錄因子，HIF-1α除與腫瘤的惡性進展有直接的關系外，多數(shù)白血病細胞可以表達HIF-1α，通過自分泌的方式調(diào)節(jié)VEGF表達，后者參與白血病細胞的自身增殖調(diào)控，以及骨髓微環(huán)境血管生長。該研究在體外探討ATRA誘導白血病細胞分化后，Hif-1和VEGF的表達變化，探討ATR

3、A是否經(jīng)過HIF-1α途徑降低VEGF表達，抑制白血病細胞的增殖。為進一步探ATRA誘導分化治療APL患者過程中，是否也經(jīng)過HIF-1α途徑降低骨髓中白血病細胞分泌VEGF抑制白血病細胞增殖活性，提供理論和實驗依據(jù)。 方法:采用ATRA誘導HL-60細胞產(chǎn)生分化模型，然后采用WST1方法和硝基四氮唑藍(NBT)還原試驗檢測了ATRA對細胞增殖和分化的影響。流式細胞術分析細胞周期的變化。RT-PCR技術檢測ATRA處理前后細胞內(nèi)轉(zhuǎn)

4、錄調(diào)控相關基因c-mycmRNA的表達，HIF-1αmRNA；VEGFmRNA表達變化。 結果: 1、1μmol/LATRA作用HL-60細胞3d后，細胞形態(tài)學變化，光鏡觀察顯示：晚幼及桿狀核、分葉核粒細胞明顯增多，細胞核明顯縮小，核仁消失，胞漿變多，核漿比縮小，核有凹陷及分葉。呈現(xiàn)分化形態(tài)學變化。 2、1μmol/LATRA作用HL-60細胞3d后，提高HL-60細胞的NBT還原能力(P＜0.01)，誘導細胞分

5、化。 3、1μmol/LATRA作用HL-60細胞3d后，對細胞增殖有明顯抑制作用(P＜0.01)，細胞周期停滯于G0/G1期。 4、1μmol/LATRA作用HL-60細胞3d后，細胞內(nèi)c-myc、VEGFmRNA表達呈現(xiàn)降低趨勢；而HIF-1αmRNA表達呈增加趨勢。 結論: 1、HL-60細胞經(jīng)不同時間的ATRA誘導分化后，VEGFmRNA，癌基因c-mycmRNA下降。這兩種基因均與腫瘤細胞的增殖