非HIF-1途徑介導(dǎo)HL-60細(xì)胞VEGF表達(dá)變化分子機(jī)制的研究.pdf

1、目的:惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展與腫瘤新生血管形成有直接的關(guān)系。血管新生在腫瘤的生長(zhǎng)、發(fā)展及轉(zhuǎn)移過(guò)程中起著重要的作用。正常情況下，機(jī)體內(nèi)促血管新生因子與血管新生抑制因子處于—平衡狀態(tài)，當(dāng)發(fā)生腫瘤性增殖時(shí)，促血管新生因子的分泌增加，導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖，新生血管形成，為不斷增殖的腫瘤細(xì)胞提供氧氣及營(yíng)養(yǎng)成分。在目前已知的促血管生成因子中，血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(VEGF)是作用最強(qiáng)、特異性最高的一種因子，在腫瘤血管形成中起著重要作用。以往的研究主要

2、集中于實(shí)體瘤，但最近的研究發(fā)現(xiàn)，在血液系統(tǒng)惡性腫瘤如白血病、多發(fā)性骨髓瘤患者中也存在著血管新生現(xiàn)象。同時(shí)還發(fā)現(xiàn)低氧誘導(dǎo)因子(HIF-1α)是在特異性低氧狀態(tài)下發(fā)揮活性的轉(zhuǎn)錄因子，HIF-1α除與腫瘤的惡性進(jìn)展有直接的關(guān)系外，多數(shù)白血病細(xì)胞可以表達(dá)HIF-1α，通過(guò)自分泌的方式調(diào)節(jié)VEGF表達(dá)，后者參與白血病細(xì)胞的自身增殖調(diào)控，以及骨髓微環(huán)境血管生長(zhǎng)。該研究在體外探討ATRA誘導(dǎo)白血病細(xì)胞分化后，Hif-1和VEGF的表達(dá)變化，探討ATR

3、A是否經(jīng)過(guò)HIF-1α途徑降低VEGF表達(dá)，抑制白血病細(xì)胞的增殖。為進(jìn)一步探ATRA誘導(dǎo)分化治療APL患者過(guò)程中，是否也經(jīng)過(guò)HIF-1α途徑降低骨髓中白血病細(xì)胞分泌VEGF抑制白血病細(xì)胞增殖活性，提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法:采用ATRA誘導(dǎo)HL-60細(xì)胞產(chǎn)生分化模型，然后采用WST1方法和硝基四氮唑藍(lán)(NBT)還原試驗(yàn)檢測(cè)了ATRA對(duì)細(xì)胞增殖和分化的影響。流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞周期的變化。RT-PCR技術(shù)檢測(cè)ATRA處理前后細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)

4、錄調(diào)控相關(guān)基因c-mycmRNA的表達(dá)，HIF-1αmRNA；VEGFmRNA表達(dá)變化。 結(jié)果: 1、1μmol/LATRA作用HL-60細(xì)胞3d后，細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化，光鏡觀察顯示：晚幼及桿狀核、分葉核粒細(xì)胞明顯增多，細(xì)胞核明顯縮小，核仁消失，胞漿變多，核漿比縮小，核有凹陷及分葉。呈現(xiàn)分化形態(tài)學(xué)變化。 2、1μmol/LATRA作用HL-60細(xì)胞3d后，提高HL-60細(xì)胞的NBT還原能力(P＜0.01)，誘導(dǎo)細(xì)胞分

5、化。 3、1μmol/LATRA作用HL-60細(xì)胞3d后，對(duì)細(xì)胞增殖有明顯抑制作用(P＜0.01)，細(xì)胞周期停滯于G0/G1期。 4、1μmol/LATRA作用HL-60細(xì)胞3d后，細(xì)胞內(nèi)c-myc、VEGFmRNA表達(dá)呈現(xiàn)降低趨勢(shì)；而HIF-1αmRNA表達(dá)呈增加趨勢(shì)。 結(jié)論: 1、HL-60細(xì)胞經(jīng)不同時(shí)間的ATRA誘導(dǎo)分化后，VEGFmRNA，癌基因c-mycmRNA下降。這兩種基因均與腫瘤細(xì)胞的增殖