穴位敷貼治療小鼠過(guò)敏性鼻炎免疫機(jī)制的研究.pdf

1、過(guò)敏性鼻炎(allergicrhinitis)也稱變態(tài)反應(yīng)性鼻炎、變應(yīng)性鼻炎，是一種吸入變應(yīng)原而導(dǎo)致的以鼻黏膜嗜酸性粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞等多種炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，IgE介導(dǎo)的免疫細(xì)胞釋放化學(xué)介質(zhì)引起的Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)炎癥性疾病，以鼻癢、打噴嚏、流清涕等為主要癥狀，可并發(fā)哮喘、蕁麻疹等。國(guó)外研究揭示過(guò)敏性鼻炎發(fā)生、發(fā)展與社會(huì)開放程度和經(jīng)濟(jì)發(fā)展水平密切相關(guān)；近幾年，我國(guó)經(jīng)濟(jì)發(fā)展很快，過(guò)敏性鼻炎的患病率也呈明顯上升趨勢(shì)，我國(guó)該病發(fā)病率在10％左

2、右，嚴(yán)重危害人民身心健康。 西醫(yī)治療過(guò)敏性鼻炎以免疫療法和藥物治療為主，均存在不足。免疫療法，變應(yīng)原較難確定而且標(biāo)準(zhǔn)難一致，起效慢，療程長(zhǎng)，不宜堅(jiān)持，難以治愈；藥物治療以抗組胺藥、縮血管藥、糖皮質(zhì)激素、抗膽堿能藥、肥大細(xì)胞穩(wěn)定劑等為主，雖然改善癥狀較快，但毒副作用大。 過(guò)敏性鼻炎屬于中醫(yī)學(xué)“鼻鼽”、“鼽嚏”的范疇。針灸穴位敷貼治療過(guò)敏性鼻炎具有悠久的歷史和良好的療效。雖然針灸穴位敷貼治療過(guò)敏性鼻炎取得較好療效，但對(duì)其免疫

3、機(jī)制的研究報(bào)道較少，處于臨床觀察或個(gè)別免疫指標(biāo)檢測(cè)等較淺層次階段。本論文系統(tǒng)研究穴位敷貼治療小鼠過(guò)敏性鼻炎的免疫機(jī)制，為針灸穴位敷貼治療過(guò)敏性鼻炎提供科學(xué)的理論依據(jù)。 一、研究方法與內(nèi)容(一)文獻(xiàn)研究運(yùn)用文獻(xiàn)研究方法，分別闡述現(xiàn)代醫(yī)學(xué)、中醫(yī)學(xué)對(duì)過(guò)敏性鼻炎的臨床與實(shí)驗(yàn)研究，并在此基礎(chǔ)上進(jìn)行評(píng)述與展望。 (二)實(shí)驗(yàn)研究本研究主要通過(guò)不同處理組別對(duì)過(guò)敏性鼻炎小鼠行為學(xué)、病理學(xué)、血液及肺泡灌洗液肥大細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、IgE、淋

4、巴細(xì)胞特異性增殖及分泌淋巴細(xì)胞因子等多個(gè)環(huán)節(jié)的影響，研究穴位敷貼治療過(guò)敏性鼻炎的機(jī)理，從細(xì)胞、分子水平揭示穴位敷貼治療過(guò)敏性鼻炎的機(jī)制。 1、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與分組：雌性7周齡BALB/c小鼠60只，體重20～25克，清潔級(jí)，隨機(jī)分為正常空白組小鼠、卵白蛋白(OVA)過(guò)敏性鼻炎組小鼠、穴位敷貼治療組小鼠、地塞米松治療組小鼠、假治療組小鼠5組。 2、OVA過(guò)敏性鼻炎模型制備：采用OVA混懸液腹腔注射及滴鼻造模法。 3、穴位

5、敷貼藥物制備與用穴：依據(jù)中醫(yī)藥理論和導(dǎo)師學(xué)術(shù)思想配制藥物及選穴。 4、觀察不同處理組別OVA所致過(guò)敏性鼻炎小鼠模型行為學(xué)及病理組織學(xué)改變； 5、觀察不同處理組別OVA所致過(guò)敏性鼻炎小鼠模型血液及呼吸道局部的免疫反應(yīng)[血液及肺泡灌洗液(BALF)細(xì)胞分類、IgE檢測(cè)、Th1/Th2淋巴細(xì)胞及其分泌淋巴細(xì)胞因子、腹腔肥大細(xì)胞脫顆粒試驗(yàn)]； 6、觀察不同處理組別OVA所致過(guò)敏性鼻炎小鼠模型外周血液?jiǎn)蝹€(gè)核淋巴細(xì)胞分泌細(xì)胞

6、因子功能； 7、分析各相關(guān)指標(biāo)的改變意義，闡明穴位敷貼治療過(guò)敏性鼻炎的免疫學(xué)機(jī)制。 二、研究結(jié)果(一)文獻(xiàn)研究1、現(xiàn)代醫(yī)學(xué)、中醫(yī)學(xué)研究均表明過(guò)敏性鼻炎與過(guò)敏性哮喘相互關(guān)聯(lián)。 2、西藥治療過(guò)敏性鼻炎普遍都有不同癥狀、不同程度的副作用，這是西藥治療本病存在的最嚴(yán)重問(wèn)題。而現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的免疫治療也存在起效慢，難以治愈的缺點(diǎn)。為此，迫切需要找尋基本無(wú)副作用且療效顯著的其他治療方法。中醫(yī)針灸是一條探索的道路。另一方面，盡管現(xiàn)代

7、醫(yī)學(xué)在過(guò)敏性鼻炎的治療上有不足之處，但現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)本病病理生理基礎(chǔ)的認(rèn)識(shí)，實(shí)驗(yàn)研究方法等為中醫(yī)治療過(guò)敏性鼻炎的研究提供了良好的理論基礎(chǔ)。中醫(yī)研究過(guò)敏性鼻炎需要向現(xiàn)代醫(yī)學(xué)學(xué)習(xí)和借鑒。 (二)實(shí)驗(yàn)研究1、通過(guò)小鼠行為學(xué)觀察，發(fā)現(xiàn)OVA過(guò)敏性鼻炎組小鼠鼻噴嚏平均次數(shù)明顯多于正常空白組小鼠，二者有極顯著差異。表明使用的OVA過(guò)敏性鼻炎組小鼠模型較成功，小鼠出現(xiàn)顯著的過(guò)敏性鼻炎癥狀——噴嚏次數(shù)顯著增加；穴位敷貼組小鼠鼻噴嚏平均次數(shù)明顯少于O

8、VA過(guò)敏性鼻炎組小鼠。 2、通過(guò)觀察小鼠鼻黏膜組織病理學(xué)變化，結(jié)果正?？瞻捉M小鼠鼻黏膜大多是輕度的嗜酸性細(xì)胞、嗜中性細(xì)胞、淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，而OVA過(guò)敏性鼻炎組小鼠鼻黏膜上述三種細(xì)胞浸潤(rùn)都是中度以上，與正?？瞻捉M小鼠相比，OVA過(guò)敏性鼻炎組小鼠鼻黏膜嗜酸性細(xì)胞浸潤(rùn)明顯較重，嗜中性細(xì)胞浸潤(rùn)也明顯較重但不如嗜酸性細(xì)胞嚴(yán)重，淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)也明顯較重但也不如嗜酸性細(xì)胞嚴(yán)重。 3、通過(guò)小鼠腹腔肥大細(xì)胞脫顆粒試驗(yàn)，顯示OVA過(guò)敏性鼻炎小鼠

9、的腹腔肥大細(xì)胞有明顯的脫顆?，F(xiàn)象，與正常小鼠腹腔肥大細(xì)胞脫顆粒率相比，二者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 4、通過(guò)觀察小鼠血液系統(tǒng)血細(xì)胞分類檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)與正?？瞻捉M小鼠相比，OVA過(guò)敏性鼻炎組小鼠外周血嗜酸性粒細(xì)胞(EOS)百分含量及絕對(duì)值都明顯增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 5、通過(guò)觀察小鼠血液系統(tǒng)血清IgE檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)與正?？瞻讓?duì)照組小鼠相比，OVA過(guò)敏性鼻炎組與假治療組小鼠的血清sIgE含量顯著增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與OVA過(guò)敏性鼻炎

10、組小鼠相比，穴位敷貼治療組與地塞米松治療組小鼠的血清OVAsIgE含量顯著降低，差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 6、通過(guò)觀察小鼠脾淋巴細(xì)胞系統(tǒng)脾T淋巴細(xì)胞特異性增殖實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)正常空白組小鼠脾淋巴細(xì)胞在體外受OVA刺激后沒(méi)有明顯增殖；OVA過(guò)敏性鼻炎組、假治療組小鼠脾淋巴細(xì)胞在體外受OVA刺激后顯著增殖，與正常空白組小鼠的相比差異極顯著，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。OVA過(guò)敏性鼻炎組、假治療組二組小鼠脾淋巴細(xì)胞OVA特異性增殖指數(shù)沒(méi)有明顯差異。而穴位敷貼

11、治療組、地塞米松治療組小鼠脾淋巴細(xì)胞在體外受OVA刺激后增殖又不明顯，與OVA過(guò)敏性鼻炎組小鼠的相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 7、通過(guò)觀察小鼠脾淋巴細(xì)胞系統(tǒng)分泌淋巴細(xì)胞因子功能檢測(cè)，顯示與正常對(duì)照組小鼠相比，OVA過(guò)敏性鼻炎組小鼠血清Th1淋巴細(xì)胞因子(IFN-γ、IL-2)降低，Th2淋巴細(xì)胞因子(IL-4、IL-10)升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，同時(shí)還發(fā)現(xiàn)IFN-γ、IL-4的變化要大于IL-2、IL-10的變化；與OVA過(guò)敏性鼻炎

12、組小鼠血清相比，穴位敷貼組、地塞米松治療組小鼠血清Th1/Th2淋巴細(xì)胞因子的上述變化得到糾正，與OVA過(guò)敏性鼻炎組小鼠血清相比，Th1顯著增高、Th2淋巴細(xì)胞因子顯著降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；假治療組與OVA過(guò)敏性鼻炎組小鼠血清Th1/Th2淋巴細(xì)胞因子濃度相比，差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 8、通過(guò)BALF細(xì)胞學(xué)檢查與BALF淋巴細(xì)胞因子的檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)OVA過(guò)敏性鼻炎組小鼠BALF中細(xì)胞總數(shù)、巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、嗜酸性淋巴細(xì)胞和中性粒

13、細(xì)胞的數(shù)量較正常組分別升高，其中以嗜酸性淋巴細(xì)胞的增加最為明顯。與OVA過(guò)敏性鼻炎組相比，穴位敷貼組的上述各細(xì)胞成分分別減少，其中對(duì)嗜酸性淋巴細(xì)胞的抑制作用最明顯；地塞米松治療組的上述各細(xì)胞成分分別減少。穴位敷貼組與地塞米松治療組相比，各細(xì)胞成分無(wú)明顯差別。研究還發(fā)現(xiàn)，OVA過(guò)敏性鼻炎組小鼠BALF炎癥細(xì)胞滲出明顯，尤其是嗜酸性淋巴細(xì)胞。穴位敷貼、激素能減輕OVA引起的BALF炎癥細(xì)胞滲出，也是以抑制嗜酸性淋巴細(xì)胞最為顯著，而假治療不能

14、抑制OVA引起的BALF炎癥細(xì)胞滲出。 與相應(yīng)的脾淋巴細(xì)胞分泌的淋巴細(xì)胞因子相比，BALF的淋巴細(xì)胞因子濃度要低；IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10在BALF的濃度與在血清的濃度比較，IFN-γ、IL-2變化較明顯，其他差別不大。 三、研究結(jié)論：從以上研究結(jié)果可以得到以下結(jié)論：1、過(guò)敏性鼻炎和過(guò)敏性哮喘在實(shí)驗(yàn)研究及臨床治療等某些方面有相似之處。 2、穴位敷貼治療能顯著減少OVA過(guò)敏性鼻炎噴嚏次數(shù)。

15、 3、小鼠OVA過(guò)敏性鼻炎模型鼻黏膜嗜酸性細(xì)胞浸潤(rùn)最明顯，嗜酸性細(xì)胞浸潤(rùn)在OVA過(guò)敏性鼻炎模型發(fā)病機(jī)制中起重要作用。 4、小鼠穴位敷貼、地塞米松治療能顯著降低肥大細(xì)胞脫顆粒，提示穴位敷貼、地塞米松治療通過(guò)抑制OVA過(guò)敏性鼻炎小鼠肥大細(xì)胞釋放組織胺、5-羥色胺、白三烯、緩激肽、嗜酸性細(xì)胞趨化因子等過(guò)敏介質(zhì)，降低血管通透性、減少炎癥滲出等，發(fā)揮抗過(guò)敏作用。可以推測(cè)穴位敷貼抗過(guò)敏機(jī)制為穩(wěn)定肥大細(xì)胞膜，抑制肥大細(xì)胞脫顆粒，減弱致炎介質(zhì)產(chǎn)

16、生。 5、在OVA引起的Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)中，以EOS為主的炎癥細(xì)胞介導(dǎo)的呼吸道免疫病理炎癥反應(yīng)在OVA過(guò)敏性鼻炎模型中起著重要作用。穴位敷貼、地塞米松治療通過(guò)抑制OVA過(guò)敏性鼻炎組小鼠外周血EOS產(chǎn)生而對(duì)過(guò)敏性鼻炎起到治療作用。 6、OVA過(guò)敏性鼻炎組、假治療組小鼠脾淋巴細(xì)胞在體內(nèi)已經(jīng)接受了OVA抗原信息，體外再受OVA刺激后，OVA特異性淋巴細(xì)胞克隆顯著活化，表現(xiàn)為顯著增殖；假治療不能抑制OVA特異性增殖免疫反應(yīng)。穴位敷貼

17、、地塞米松通過(guò)抑制小鼠免疫細(xì)胞，使之對(duì)OVA體外刺激不再發(fā)生活化，反映為增殖不明顯。表明穴位敷貼、地塞米松通過(guò)抑制小鼠免疫反應(yīng)達(dá)到治療過(guò)敏性鼻炎目的。 7、OVA刺激小鼠免疫系統(tǒng)產(chǎn)生了特異性體液免疫反應(yīng)——特異性IgE(sIgE)，提示OVA過(guò)敏性鼻炎是一種IgE介導(dǎo)的Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)，顯示了IgE在OVA過(guò)敏性鼻炎發(fā)病機(jī)制中的作用。提示穴位敷貼、地塞米松治療通過(guò)降低小鼠體內(nèi)sIgE達(dá)到治療過(guò)敏性鼻炎目的。 8、OVA小鼠哮