中國人nm23H1、KAI1基因遺傳不穩(wěn)定性及腫瘤臨床病理特性的相關(guān)性研究.pdf

1、研究背景 惡性腫瘤起病隱匿，微小癌灶的浸潤和轉(zhuǎn)移難以及時(shí)探查和治療，是患者生存率低的主要原因。為此，闡明腫瘤浸潤及轉(zhuǎn)移的機(jī)制，確立可靠的預(yù)后指標(biāo)和治療靶點(diǎn)極為重要。 研究發(fā)現(xiàn)，隨著腫瘤進(jìn)展和轉(zhuǎn)移的發(fā)生，腫瘤細(xì)胞內(nèi)抑癌蛋白的表達(dá)量減少，逐漸失去對(duì)腫瘤細(xì)胞生長、轉(zhuǎn)移的抑制，表現(xiàn)為腫瘤的浸潤與轉(zhuǎn)移。而抑癌基因的失活是編碼蛋白量減少的重要機(jī)制之一。為揭示抑癌基因失活的機(jī)理，國內(nèi)外針對(duì)P53、P16等抑癌基因作了大量研究，結(jié)果表明基因的

2、遺傳不穩(wěn)定性改變，即微衛(wèi)星不穩(wěn)定性(microsatelliteinstablility，MSI)和雜合性缺失(lossofheterozygosity，LOH)，可能是產(chǎn)生基因突變，導(dǎo)致抑癌基因功能失調(diào)，引起腫瘤發(fā)生的重要因素。微衛(wèi)星是由2-6個(gè)核苷酸組成，具有高度多態(tài)性的簡(jiǎn)單串聯(lián)核苷酸重復(fù)序列。MSI是指由于復(fù)制錯(cuò)誤導(dǎo)致微衛(wèi)星的增多或減少。LOH是指一個(gè)位點(diǎn)上兩個(gè)多態(tài)性的等位基因中的一個(gè)出現(xiàn)缺失或變異。大量研究表明，抑癌基因MSI與

3、LOH在腫瘤的多步驟發(fā)生過程中起著重要的作用。MSI首先是在遺傳性非息肉性結(jié)直腸癌(hereditynon-polyposiscolorectalcancer，HNPCC)中發(fā)現(xiàn)的，后在各種散發(fā)性腫瘤如大腸癌、胃癌、子宮內(nèi)膜癌、乳腺癌、前列腺癌和胰腺癌中均發(fā)現(xiàn)MSI。研究表明MSI的發(fā)生提高了隨機(jī)突變率，更重要的是導(dǎo)致了腫瘤相關(guān)基因的突變，可能是引起腫瘤發(fā)生的一個(gè)重要機(jī)制。若DNA復(fù)制錯(cuò)誤的結(jié)果是等位基因片段的缺失，則導(dǎo)致LOH的發(fā)生。

4、研究發(fā)現(xiàn)與抑癌基因相關(guān)的雜合性微衛(wèi)星位點(diǎn)常伴有等位基因的丟失，即LOH的發(fā)生。所以分析LOH已成為目前檢測(cè)抑癌基因失活、發(fā)現(xiàn)和定位新的腫瘤抑制基因的重要手段之一。 nm23H1基因定位于17號(hào)染色體長臂(17q21)，是一種重要的抑癌基因。Steeg等在對(duì)鼠黑色素瘤的研究中發(fā)現(xiàn)，nm23H1基因的特異性表達(dá)產(chǎn)物nm23H1蛋白/核苷二磷酸激酶(NDPK)能有效抑制腫瘤轉(zhuǎn)移，逐將nm23H1冠以“腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因”，并對(duì)其抗腫瘤轉(zhuǎn)

5、移機(jī)理進(jìn)行了大量研究。但多集中于nm23H1蛋白/核苷二磷酸激酶(NDPK)表達(dá)的免疫組織化學(xué)研究，而有關(guān)腫瘤轉(zhuǎn)移時(shí)nm23H1基因的遺傳學(xué)研究，國內(nèi)外均較少。KAI基因是近年發(fā)現(xiàn)的一個(gè)新的腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因，Dong等首先從前列腺癌細(xì)胞系中分離鑒定，能抑制鼠前列腺癌細(xì)胞肺轉(zhuǎn)移但不影響其致瘤能力。有研究證明，在多種癌組織和細(xì)胞系中檢測(cè)到KAI1在分子水平上的表達(dá)，然而它在胃癌中的表達(dá)情況，國內(nèi)外報(bào)道較少，且結(jié)論尚有爭(zhēng)議。胃癌KAI1基因的

6、遺傳不穩(wěn)定性研究尚鮮見報(bào)道。 研究目的 研究D17S396位點(diǎn)、D11S1344、D11S1326位點(diǎn)微衛(wèi)星不穩(wěn)定(microsatelliteinstablility,MSI)和雜合性缺失(lossofheterozygosity,LOH)，對(duì)腫瘤nm23H1蛋白、KAI1蛋白表達(dá)的影響，闡明nm23H1基因、KAI1基因遺傳不穩(wěn)定性與腫瘤進(jìn)展的關(guān)系，為揭示抑癌基因作用機(jī)制和腫瘤轉(zhuǎn)移機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 研究方法 (

7、1)石蠟包埋組織抽提DNA。(2)PCR-單鏈構(gòu)象多態(tài)性(SSCP)，常規(guī)銀染顯示條帶。(3)Envision免疫組織化學(xué)檢測(cè)，(4)Leica-Qwin計(jì)算機(jī)圖像分析技術(shù)。(5)SPSS軟件統(tǒng)計(jì)分析。 研究結(jié)果 (1)卵巢上皮性腫瘤nm23H1基因遺傳不穩(wěn)定性及腫瘤臨床病理特性的相關(guān)性研究：①卵巢上皮性癌D17S396位點(diǎn)遺傳不穩(wěn)定發(fā)生率為40％，明顯高于交界性腫瘤的9.52％，而在良性腫瘤和正常卵巢組織中，未見該位點(diǎn)遺傳不

8、穩(wěn)定的發(fā)生。其中，LOH的發(fā)生率，隨組織惡性程度的增高而增加(P＜0.05)。在卵巢上皮性癌中，LOH發(fā)生率在淋巴轉(zhuǎn)移組高于無淋巴轉(zhuǎn)移組，F(xiàn)IGOⅢ+Ⅳ期高于Ⅰ+Ⅱ期(P＜0.05)。②nm23H1蛋白陽性率在卵巢上皮性癌和交界性腫瘤組織中分別為56.00％和57.14％，高于良性腫瘤(13.64％，P＜0.01)和正常卵巢組織的(8.33％，P＜0.01)。卵巢上皮性癌中，淋巴轉(zhuǎn)移組nm23H1蛋白陽性率低于無淋巴轉(zhuǎn)移組；FIGOⅢ+

9、Ⅳ期nm23H1蛋白陽性率低于Ⅰ+Ⅱ期(P＜0.05)。③在卵巢上皮性癌中，LOH陽性組中nm23H1蛋白陽性率(0.00％)顯著低于LOH陰性組(73.68％，P＜0.01)。 (2)胃癌KAI1基因遺傳不穩(wěn)定性及腫瘤臨床病理特性的相關(guān)性研究：①胃癌KAI1蛋白陽性檢出率為55.4％。②隨著癌組織浸潤程度的進(jìn)展，其陽性率呈降低趨勢(shì)(P＜0.01)；KAI1蛋白表達(dá)率在無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(83.9％)顯著高于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(20.0％

10、，P＜0.01)；在TNMⅠ+Ⅱ期(82.8％)明顯高于TNMⅢ+Ⅳ期(25.9％，P＜0.01)。③56例胃癌D11S1326，D11S1344位點(diǎn)的SSCP分析中，均未出現(xiàn)MSI或LOH。 結(jié)論 nm23H1基因的遺傳不穩(wěn)定性可能是卵巢上皮性癌發(fā)生發(fā)展的一個(gè)機(jī)制。nm23H1基因LOH的發(fā)生可作為卵巢組織惡變的判斷指標(biāo)。nm23H1基因的MSI和LOH通過相互獨(dú)立的途徑調(diào)控卵巢上皮癌的發(fā)生、進(jìn)展，后者可抑制卵巢上皮癌局部n