C-反應(yīng)蛋白與冠心病的相關(guān)研究.pdf

1、目的:(1)探討白細(xì)胞介素-1β(IL-1β)第5外顯子Taq I基因多態(tài)性與冠心病(coronary heart disease,CHD)及C-反應(yīng)蛋白(C-reactive protein,CRP)含量的關(guān)系.(2)構(gòu)建CRP的表達(dá)質(zhì)粒,并在大腸桿菌中表達(dá),純化獲得保持抗原性的CRP.方法:(1)采用PCR限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(PCR-RFLP)方法分別對(duì)78例冠心病病人及130例正常人的IL-1β基因Taq I多態(tài)性進(jìn)行檢測(cè),同時(shí)

2、分析不同基因型之間的血清CRP含量的差異.(2)應(yīng)用PCR方法,從人肝細(xì)胞cDNA文庫(kù)中擴(kuò)增人CRP cDNA基因片段,與表達(dá)質(zhì)粒載體pCRT7/NT TOPO重組,獲得表達(dá)質(zhì)粒CRP-pCRT7/NT,用氨芐青霉素平板篩選轉(zhuǎn)化子,雙酶切及DNA測(cè)序鑒定CRP基因表達(dá)質(zhì)粒pCRT7/NTTOPO載體的整合狀態(tài),用IPTG誘導(dǎo)表達(dá),表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)SDS-PAGE分析,并利用組氨酸親和層析柱純化.結(jié)果:(1)體檢健康者和CHD患者等位基因C的頻

3、率分別為:0.942、0.965;等位基因T的頻率分別0.058、0.035;對(duì)照組和冠心病組之間的基因型頻率和等位基因頻率差異均無(wú)顯著性(P>0.05);但血清CRP含量在正常對(duì)照組不同基因型之間的差異有顯著性(P<0.05).(2)成功地構(gòu)建了在大腸桿菌表達(dá)CRP的質(zhì)粒,并在大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)中表達(dá)出含6個(gè)組氨酸尾的CRP融合蛋白,在上SDS-PAGE表現(xiàn)出一條約30kD的陽(yáng)性條帶,經(jīng)組氨酸親和層析柱純化后,獲得CRP的蛋白純品.結(jié)論