食管癌相關(guān)新基因ECRG-2、ECRG-4的克隆及功能研究.pdf

1、食管癌是世界上最常見(jiàn)的癌癥之一,約有一半以上的病例發(fā)生在中國(guó).該室用差異顯示PCR(DD-PCR)法從正常食管上皮和食管癌及組織中分離了4個(gè)條差異EST片段,分別命名為食管癌相關(guān)基因1~4(EsopagealCancerRelatedGene,ECRG-1~4).該課題著重于ECRG-2、ECRG-4的克隆、鑒定以及編碼蛋白生物學(xué)特性的初步設(shè)計(jì).一、ECRG-2基因的研究.1、ECRG-2基因cDNA全長(zhǎng)和基因組結(jié)構(gòu)確定;2、ECRG-

2、2組織表達(dá)分析;3、生物信息學(xué)方法預(yù)測(cè)ECRG-2基因編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能;4、ECRG-2編碼蛋白亞細(xì)胞定位;GFP熒光檢測(cè)到ECRG-2蛋白定位于細(xì)胞外膜上,與預(yù)測(cè)結(jié)果相符合.5、ECRG-2編碼蛋白的原核表達(dá);將ECRG-2基因克隆入pGEX-4T-1原核表達(dá)載體中,研究人員獲得了ECRG-2-GST融合蛋白的高效表達(dá),為抗體制備奠定了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ).6、ECRG-2基因突變篩選.在94列正常人血液樣本、40例正常食管標(biāo)本、18例配

3、對(duì)的食管癌及癌旁組織中對(duì)ECRG-2外顯子進(jìn)行突變檢測(cè),發(fā)現(xiàn)在其第四外顯子內(nèi)存在(TCA)<,3>和(TCA)<,4>兩種基因型多態(tài).二、ECRG-4基因研究.1、ECRG-4基因克隆;以因特網(wǎng)為平臺(tái),人類基因組計(jì)劃數(shù)據(jù)庫(kù)為試驗(yàn)材料,各種軟件為工具組成網(wǎng)上實(shí)驗(yàn)室,從食管癌相關(guān)基因ECRG-4的97bpEST的基礎(chǔ)上成功克隆并鑒定了該基因.2、組織分布;ECRG-4在正常食管、膀胱組織中表達(dá)明顯高于相應(yīng)的癌組織.3、ECRG-4編碼蛋白生