食管癌相關基因MGMT異常甲基化研究.pdf

1、目的：本課題組前期研究得出O6-甲基鳥嘌呤-DNA甲基轉移酶（MGMT）基因啟動子區(qū)CpG島的高甲基化與食管癌發(fā)病風險增加有關，在此基礎上我們進一步分析食管癌中MGMT基因啟動子區(qū)CpG島甲基化對其基因表達水平的影響，探討食管癌中MGMT基因表達抑制的機制，為食管癌的早期篩選提供理論依據(jù)。 方法：應用實時熒光定量PCR分析食管癌細胞株中MGMT基因mRNA的表達水平；MSP法初步檢測MGMT基因啟動子的甲基化狀態(tài)；克隆測序分析M

2、GMT基因啟動子CpG島的甲基化位點；構建雙熒光素酶報告基因載體，應用體外甲基化，分析甲基化對其啟動子活性的影響。 結果：研究的7株食管癌細胞株，5株細胞中MGMT基因的mRNA表達水平較高，只有KYSE-150和KYSE-510的表達水平較低，在表達水平高的細胞株中MSP檢測未發(fā)現(xiàn)MGMT基因甲基化，mRNA表達水平低的2株細胞KYSE-150和KYSE-510中MSP檢測發(fā)現(xiàn)為完全甲基化；MGMT基因甲基化的細胞經(jīng)5-Aza

3、-CdR處理后，甲基化狀態(tài)得到逆轉，MGMT基因的mRNA表達水平升高，為食管癌的預防和治療提供新的思路；對MGMT基因啟動子區(qū)CpG島測序分析，MGMT基因mRNA表達水平低的細胞株中MGM7啟動子CG二核苷酸的甲基化程度高，甲基化位點主要分布在轉錄起始點上游和第一外顯子部位，為應用MSP進行食管癌早期篩檢提供理論基礎；體外甲基化分析，MGMT基因啟動子甲基化抑制了啟動子的轉錄活性，進一步提示了在食管癌中MGMT基因甲基化可導致其基因