食管癌相關(guān)基因MGMT異常甲基化研究.pdf

1、目的：本課題組前期研究得出O6-甲基鳥嘌呤-DNA甲基轉(zhuǎn)移酶（MGMT）基因啟動子區(qū)CpG島的高甲基化與食管癌發(fā)病風(fēng)險增加有關(guān)，在此基礎(chǔ)上我們進一步分析食管癌中MGMT基因啟動子區(qū)CpG島甲基化對其基因表達水平的影響，探討食管癌中MGMT基因表達抑制的機制，為食管癌的早期篩選提供理論依據(jù)。 方法：應(yīng)用實時熒光定量PCR分析食管癌細胞株中MGMT基因mRNA的表達水平；MSP法初步檢測MGMT基因啟動子的甲基化狀態(tài)；克隆測序分析M

2、GMT基因啟動子CpG島的甲基化位點；構(gòu)建雙熒光素酶報告基因載體，應(yīng)用體外甲基化，分析甲基化對其啟動子活性的影響。 結(jié)果：研究的7株食管癌細胞株，5株細胞中MGMT基因的mRNA表達水平較高，只有KYSE-150和KYSE-510的表達水平較低，在表達水平高的細胞株中MSP檢測未發(fā)現(xiàn)MGMT基因甲基化，mRNA表達水平低的2株細胞KYSE-150和KYSE-510中MSP檢測發(fā)現(xiàn)為完全甲基化；MGMT基因甲基化的細胞經(jīng)5-Aza

3、-CdR處理后，甲基化狀態(tài)得到逆轉(zhuǎn)，MGMT基因的mRNA表達水平升高，為食管癌的預(yù)防和治療提供新的思路；對MGMT基因啟動子區(qū)CpG島測序分析，MGMT基因mRNA表達水平低的細胞株中MGM7啟動子CG二核苷酸的甲基化程度高，甲基化位點主要分布在轉(zhuǎn)錄起始點上游和第一外顯子部位，為應(yīng)用MSP進行食管癌早期篩檢提供理論基礎(chǔ)；體外甲基化分析，MGMT基因啟動子甲基化抑制了啟動子的轉(zhuǎn)錄活性，進一步提示了在食管癌中MGMT基因甲基化可導(dǎo)致其基因