PA生物膜形成影響因素、生物酶干預(yù)效果和抗生素對其ampC基因的誘導(dǎo)作用.pdf

1、後旦大擎博士學(xué)位論文Y770005PA生物膜形成影響因素、生物酶干預(yù)效果和抗生素對其ampC基因的誘導(dǎo)作用專業(yè)：姓名：導(dǎo)師：導(dǎo)師小組：內(nèi)科學(xué)胡必杰何禮賢教授李錫瑩教授翟滌教授叢蘭生基垂蕉塹煎盟垂：童壺整至煎垂量盤墊堡童壁蘭!盟匹玉＆盟盟墮垂蘭旦物膜內(nèi)活細(xì)菌計數(shù)，可定量的比較生物膜的形成情況，標(biāo)準(zhǔn)差小于結(jié)晶紫染色法(2)用超聲振蕩一活茵計數(shù)法檢測不同因素對生物膜形成的影響，固定培養(yǎng)基類型、培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)基流速及粘附材料，8h、24h和72

2、h的生物膜內(nèi)活茵數(shù)(LogtoCFU／3l導(dǎo)片)分別為401026、459049和520土047，PO001。表明隨培養(yǎng)時間延長，生物膜內(nèi)細(xì)菌也明顯增加；固定培養(yǎng)基類型、培養(yǎng)基流速、培養(yǎng)時間爭粘附材料，23“C和37℃形成的生物膜內(nèi)活茵數(shù)(Log。。CFU／引導(dǎo)片)分別為512043和530042，P=0039；固定培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)時間、培養(yǎng)基類型及培養(yǎng)基流速，生物膜引導(dǎo)片分別為玻璃和硅膠，結(jié)果顯示硅膠引導(dǎo)片形成生物膜內(nèi)活菌數(shù)(Log，。

3、CFU／5l導(dǎo)片)要明顯高于玻璃引導(dǎo)片，兩者分別為621040和549059，J口(O001：固定培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)時間、培養(yǎng)基及粘附材料，培養(yǎng)基流速分別為30rnl／h和90ml／h，高流速的生物膜內(nèi)活菌數(shù)(Log，。CFU／引導(dǎo)片)高于低流速組，分別為583052和5444058，尸=0002；固定培養(yǎng)溫度，培養(yǎng)時間、培養(yǎng)基流速及粘附材料，分別以M63、MH和LB作為培養(yǎng)基形成鈞生物膜內(nèi)活茵數(shù)(Log；。CFU／引導(dǎo)片)分別為60107

4、5、624士042和666012，尺0001表明隨培養(yǎng)基營養(yǎng)增加，生物膜內(nèi)活菌數(shù)也明顯增加。(3)在8h、24h、48h、72h和96h等5個不同時間點(diǎn)形成的生物膜，采用復(fù)后生物酶作用后，細(xì)菌清除率有明顯差異，依次分別為949％、906％、90O％、823％和568％。復(fù)合生物酶對培養(yǎng)48h以內(nèi)的銅綠假單胞菌生物膜清除率均超過90％，而后隨著生物膜成熟度增加，清除率明顯下降。96h清除率下降近一半。連續(xù)使用頭孢他啶的同時間隔加入復(fù)合生物

5、酶，可明顯增強(qiáng)頭孢他啶對48hBF內(nèi)細(xì)菌的殺菌作用。(4)藥敏試驗(yàn)顯示，無論粘液型還是非粘液型銅綠假單胞菌，頭孢他啶對生物膜菌的MIC值和MBC值均明顯高于浮游茴，增加至少2個稀釋度以上對于大部分菌株，頭孢他啶一復(fù)合生物酶組：對生物膜菌的MIC和MBC值明顯下降，與浮游茵的MIC值相似。粘液型和非粘液型各有I株菌，使用復(fù)合生物酶對頭孢他啶沒有增效作用，生物膜茵的MIC和MBC均無差別。復(fù)合生物酶對浮游菌的MIC值和MBC值沒有影響。連續(xù)

6、培養(yǎng)法顯示，高于MIC的頭孢他啶連續(xù)作用24h，對銅綠假單胞茵48h生物膜清除作用并不明顯，而在連續(xù)使用頭孢他啶的同時，問隙性加入復(fù)合生物酶，可明顯增強(qiáng)關(guān)孢他啶對生物膜內(nèi)細(xì)菌的殺菌作用掃描電鏡顯示細(xì)菌數(shù)量明顯減少，呈單個散在分布(5)碳青霉烯類抗生素亞胺培南、關(guān)羅培南和厄他培南對生物膜銅綠假單胞菌的ampC基因的轉(zhuǎn)錄均有明顯誘導(dǎo)作用，三者ampCmRNA表達(dá)量分別為對照組的237、188和I09，而受試的3種青霉素類或頭孢菌素類沒有類似