當歸中（Z）-藁本內(nèi)酯提取純化及抗腦缺血作用研究.pdf

1、在國際保健食品市場上，當歸產(chǎn)品占有非常重要地位。但我國對其主要活性成分(Z)一藁本內(nèi)酯的相關(guān)研究還比較薄弱。本課題以(z)一藁本內(nèi)酯為對象，對其純化、含量測定、工藝提取及抗腦缺血活性進行了研究，為當歸在國際保健食品市場的進一步應(yīng)用提供參考。 主要結(jié)果如下： 1、(Z)一藁本內(nèi)酯的純化及穩(wěn)定性研究 1．1(Z)一藁本內(nèi)酯的純化——高速逆流色譜法(HSCCC) 應(yīng)用高速逆流色譜法(HSCCC)法，采用正己烷一

2、乙酸乙酯一甲醇一水(7：2：5：4)溶劑系統(tǒng)，純化了當歸中(z)．藁本內(nèi)酯，純度大于99％，并通過紫外光譜、紅外光譜、質(zhì)譜及核磁共振譜圖確證了其結(jié)構(gòu)，為制備(z)．藁本內(nèi)酯對照品提供了一種簡捷實用的新途徑。 1.2(Z)一藁本內(nèi)酯穩(wěn)定性研究 為尋求對照品(Z)一藁本內(nèi)酯穩(wěn)定保存的方法，進行了以下研究： (Z)一藁本內(nèi)酯在室溫保存，15天后進行GC—MS分析。結(jié)果表明(Z)一藁本內(nèi)酯在室溫條件下不穩(wěn)定，其異構(gòu)化途徑

3、主要是脫氫產(chǎn)生正丁烯基苯酞和氧化產(chǎn)生3，d一環(huán)氧藁本內(nèi)酯。 (z)一藁本內(nèi)酯在乙醇中保存，30天后進行GC—MS分析。結(jié)果表明(z)一藁本內(nèi)酯在乙醇溶液狀態(tài)下不穩(wěn)定，部分異構(gòu)化途徑與空氣中的相似。 (Z)一藁本內(nèi)酯在三氯甲烷中保存，分別于30天、60天、90天、180天進行GC檢測。結(jié)果表明(z)一藁本內(nèi)酯在三氯甲烷中保存性質(zhì)穩(wěn)定，180天后純度仍大于98％。對照品(Z)一藁本內(nèi)酯可在三氯甲烷中穩(wěn)定保存。 2、(

4、Z)一藁本內(nèi)酯含量測定方法研究 以鄰苯二甲酸二乙酯為內(nèi)標，利用毛細管柱氣相色譜法對(Z)-藁本內(nèi)酯的含量測定方法進行了方法學研究。結(jié)果顯示，(z)-藁本內(nèi)酯在5.23～26.15mg/mL范圍內(nèi)呈良好的線形關(guān)系，回歸方程為Y=0.8300X+0.7893 r=0.9999，平均回收率為98.96[％]，RSD=0.53[％](n=5)。本研究為(z)-藁本內(nèi)酯的含量測定提供了一種簡單、靈敏、準確的方法。 3、(Z)一藁本

5、內(nèi)酯提取工藝的研究 3．1水蒸汽蒸餾、超臨界C0<,2>流體提取(Z)-藁本內(nèi)酯收率的比較 比較了生產(chǎn)中幾種提取方法對(Z)-藁本內(nèi)酯收率的影響。直接加熱蒸餾可提取當歸中總(Z)-藁本內(nèi)酯的67.2％，間接加熱蒸餾僅提取當歸中總(Z)-藁本內(nèi)酯的3.1[％]，超臨界CO<,2>流體提取可提取當歸中總(Z)-藁本內(nèi)酯的90[％]。因而超臨界C0<,2>流體法對(Z)一藁本內(nèi)酯的提取更有優(yōu)勢。 3．2水蒸汽蒸餾、超臨

6、界CO<,2>流體對(Z)-藁本內(nèi)酯異構(gòu)化的影響 比較了直接加熱蒸餾提取及超臨界CO<,2>流體提取對(Z)-藁本內(nèi)酯異構(gòu)化的影響。超臨界CO<,2>流體由于其提取溫度在45℃及惰性氣體CO<,2>環(huán)境下進行，很好的保障了(Z)一藁本內(nèi)酯的穩(wěn)定性，而直接加熱蒸餾提取則產(chǎn)生了很多新異構(gòu)化物質(zhì)，如3，4一二甲基苯甲醛、4-羥基-3-甲基乙酰苯、2，4，5一三甲基苯甲醛等。這些物質(zhì)具體產(chǎn)生途徑還有待于進一步研究。 3.3水蒸汽

7、蒸餾、超臨界CO<,2>流體提取所得(z)-藁本內(nèi)酯穩(wěn)定性比較 利用氣相色譜法比較了直接加熱蒸餾提取及超臨界CO<,2>流體提取的(Z)-藁本內(nèi)酯室溫放置6個月的穩(wěn)定性。直接加熱蒸餾提取的(Z)-藁本內(nèi)酯的面積歸一化含量由87.09[％]降低到68.01[％]，而超臨界CO<,2>流體提取的(Z)-藁本內(nèi)酯的面積歸一化含量由80.20[％]提高到86.98[％]。超臨界CO<,2>流體提取的(Z)-藁本內(nèi)酯穩(wěn)定性較好，其百分含量

8、提高的原因可能是由于提取物中(E)-藁本內(nèi)酯的轉(zhuǎn)化成(z)-藁本內(nèi)酯所致。 4、(Z)-藁本內(nèi)酯抗腦缺血作用研究 4.1(Z)一藁本內(nèi)酯對實驗性腦缺血損傷的保護作用 采用大鼠全腦缺血模型(二血管阻斷缺血模型)及局灶性腦缺血模型(栓線法)分別對(Z)-藁本內(nèi)酯的抗腦缺血活性進行了研究。結(jié)果顯示灌胃(Z)-藁本內(nèi)酯(20、40mg/kg)可顯著降低大鼠全腦缺血模型大腦皮層神經(jīng)細胞核固縮率，顯著降低大鼠局灶性腦缺血模型

9、的運動功能障礙、腦缺血梗塞面積及動物腦水腫程度。提示(Z)-藁本內(nèi)酯具有抗腦缺血活性。經(jīng)文獻檢索，目前還未發(fā)現(xiàn)相關(guān)(Z)-藁本內(nèi)酯抗腦缺血活性的報道。 4.2(Z)-藁本內(nèi)酯對腦缺血大鼠海馬組織血流的影響 (z)-藁本內(nèi)酯(20mg/kg、40 mg/Kg)可有效提高大鼠局灶性腦缺血模型海馬組織血流。 4.3(Z)-藁本內(nèi)酯對犬離體基底動脈血管舒張的作用 (Z)-藁本內(nèi)酯對基底動脈血管條有明顯的舒張作用。

10、在20mg/L，的濃度時，可顯著降低去氧腎上腺素引起的基底動脈血管條的張力。 4.4(Z)-藁本內(nèi)酯對ATP依賴性鉀通道的影響 (Z)-藁本內(nèi)酯對80 mmol/LKCI導致的離體基底動脈血管條收縮無明顯作用，而對30 mmol/LKCl導致的血管條收縮有明顯的舒張作用，這種舒張作用又可被ATP依賴性鉀通道特異性抑制劑格列苯脲所抑制，提示(Z)-藁本內(nèi)酯對血管的舒張與ATP依賴性鉀通道有關(guān)。 4.5(Z)-藁本內(nèi)