光甘草定提取純化及抗銀屑病作用和機(jī)理研究.pdf

1、銀屑病由多基因遺傳、多環(huán)境因素刺激誘導(dǎo)的免疫異常性炎癥性增生性皮膚病，主要表現(xiàn)IL-23/IL17炎癥反應(yīng)軸上相關(guān)因子的調(diào)節(jié)。市場(chǎng)上多數(shù)治療銀屑病的藥物如糖皮質(zhì)激素、維生素A衍生物、水楊酸、喜樹(shù)堿、雷公藤內(nèi)酯等，長(zhǎng)期使用對(duì)機(jī)體肝、腎和免疫功能有嚴(yán)重?fù)p壞作用。近年學(xué)者提出：“中醫(yī)與中西醫(yī)結(jié)合是防治牛皮癬（銀屑病）的方向”。光甘草定是從甘草植物提取出的天然產(chǎn)物，已有百年的藥用歷史，在抗炎抗氧化和治療痤瘡等方面有廣泛的應(yīng)用，此外，光甘草定長(zhǎng)期

2、作為護(hù)膚品成分，本文以探索光甘草定在治療銀屑病的方面的作用和機(jī)理研究為重點(diǎn)。具體研究?jī)?nèi)容和結(jié)果如下：
　　1）光甘草定的分離純化及結(jié)構(gòu)鑒定。本文采取用乙酸乙酯回流2h，料液比為1:10的提取方法，通過(guò)兩次層析分離，最后用半制備液相得到光甘草定純品。通過(guò)高效液相和核磁共振進(jìn)行純度及結(jié)構(gòu)確認(rèn)。建立高效液相快速檢測(cè)光甘草定含量方法。
　　2）光甘草定的抗銀屑病活性研究。首先建立咪喹莫特乳劑（IMQ）誘導(dǎo)的小鼠銀屑病耳廓腫脹模型和背

3、部皮膚破損模型。其次，根據(jù)光甘草定（PT）在人體皮膚用藥標(biāo)準(zhǔn)設(shè)置不同濃度進(jìn)行給藥。1）對(duì)小鼠耳廓紅腫程度的進(jìn)行表觀觀察以及打孔稱(chēng)重后發(fā)現(xiàn)，在PT（30g/kg、15g/kg）時(shí)明顯抑制效果，抑制率高達(dá)68.37％和56.98%。2）對(duì)小鼠背部皮膚紅腫、鱗屑、腫脹程度的進(jìn)行PAIS評(píng)分，繪制趨勢(shì)線以觀察各組小鼠皮損的變化情況，發(fā)現(xiàn)PT（30g/kg、15g/kg）組小鼠具有明顯的抑制效果。最后，針對(duì)上述結(jié)果采用了 HE染色方法從組織形態(tài)方

4、面觀察組織腫脹和損傷作用，研究發(fā)現(xiàn)，正常組的耳朵和背部皮膚的組織形態(tài)表現(xiàn)正常；單獨(dú)使用IMQ時(shí)，小鼠耳朵和背部皮膚角質(zhì)層明顯增厚和炎性細(xì)胞浸潤(rùn)增多（細(xì)胞固縮）；FK組和PT組組均有一定的抑制作用，通過(guò)對(duì)比發(fā)現(xiàn)PT（30g/kg、15g/kg）組小鼠的耳朵和背部皮膚切片的變化更明顯，包括耳朵和皮膚腫脹程度明顯降低（趨于正常組）以及細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)的比例明顯變小等，活性優(yōu)于陽(yáng)性藥。
　?。?）光甘草定的抗銀屑病機(jī)理研究。收集上述的小鼠銀

5、屑病組織樣品，提取蛋白和轉(zhuǎn)錄基因。通過(guò)熒光定量PCR（RTF-QPCR）和免疫組織化學(xué)法（IHC）檢測(cè)組織中各目標(biāo)因子的表達(dá)情況。實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，IMQ單獨(dú)使用時(shí)小鼠皮膚中的P65、IFN-γ、IL-17A、IL-6、COX-2、IL-22、IL-23、CD4、CD8?的表達(dá)量明顯的增加，各PT組對(duì)這些炎癥介質(zhì)均有一定程度的抑制效果，其中高濃度30g/kg組的抑制作用最強(qiáng)，并且比陽(yáng)性藥好。由此可見(jiàn)，光甘草定是通過(guò)抑制上IL-23/IL17