有毒生物堿的高效毛細管電泳分析以及激光誘導熒光技術的應用探討.pdf

1、毒物分析是運用化學和藥學的原理，采用科學的分析方法和高科技檢驗手段，對進入人或動物體內(nèi)的毒物或可疑有毒物質(zhì)、毒品或其代謝物進行提取、分離和分析，以查明中毒原因，澄清案件性質(zhì)，為偵查破案提供重要線索和為司法審判提供證據(jù)，同時也為醫(yī)療急救和預防制定措施提供依據(jù)。 高效毛細管電泳(HighPerformanceCapillaryelectrophoresis，HPCE)在法庭毒物分析中是一種新的檢測工具，這門技術融合了電泳和色譜技術，

2、儀器設備簡單，樣品和試劑損耗小，能提供多種檢測模式。 激光誘導熒光(LaserInducedFluorescence，LIF)作為一種高靈敏和微量的HPLC和HPCE檢測技術在很多方面得到了廣泛的應用。與其它檢測方式相比，它最大的優(yōu)點是具有極高的靈敏度。 本研究主要包括以下兩方面的內(nèi)容： 一、應用毛細管區(qū)帶電泳一紫外檢測建立了人體血與尿中14種常見有毒生物堿的系統(tǒng)分析方法，包括：烏頭堿類(烏頭堿、次烏頭堿、新烏頭

3、堿)、高烏甲素、雪上一枝蒿甲素、莨菪堿類(阿托品、溴甲阿托品、東莨菪堿、山莨菪堿)、茶堿、馬錢子堿、士的寧、奎寧和氯喹； 二、探討了毛細管區(qū)帶電泳一激光誘導熒光檢測技術在不同類型的毒物分析中的應用，并建立了分析苯丙胺類毒物的系統(tǒng)方法，包括：苯丙胺、甲基苯丙胺、MDA、MDMA、麻黃堿和偽麻黃堿。 第一部分HPCE-UV在有毒生物堿分析中的應用 由于上述幾種生物堿在性質(zhì)上有較大差異，無法在同一電泳條件下分開，因此將

4、它們分成兩組，對體外檢材和體內(nèi)檢材分別進行實驗。 第一組：高烏甲素、雪上一枝蒿甲素、阿托品、溴甲阿托品、東莨菪堿、山莨菪堿、馬錢子堿、士的寧、奎寧和氯喹。電泳條件為：毛細管柱75[tm×50．2cm，100mM磷酸鹽緩沖液(pH4．O)：CH3CN=95：5(v／v)，操作電壓16kV，柱溫25℃，壓力進樣O．5psi×10s，檢測波長195nm，鹽酸普魯卡因為內(nèi)標，分析時間為16min。 第二組：烏頭堿、次烏頭堿、新烏

5、頭堿和茶堿。電泳條件為：毛細管柱75[tm×50．2cm，70mMtris一50mM硼酸(pH8．62)，操作電壓16kV，柱溫25℃，壓力進樣O．5psi×10s，檢測波長235nm，鹽酸麻黃堿為內(nèi)標，分析時間為8min。 對于體外檢材，采用標準溶液直接進樣，進行方法學考察，并以烏頭堿類藥材(川烏、草烏)為代表，進行提取回收率考察。對于體內(nèi)檢材(主要為血和尿)，樣品前處理采用Oasis小柱固相萃取，進行方法學考察。 考

6、察了所建立方法的準確性、精密度、靈敏度、線性和定性指標等。結(jié)果：本方法分離效率高，分析速度快，靈敏度高(尿樣或血樣中的最低檢測濃度可達5—40ng·mL-1，天內(nèi)和天間精密度、回收率均符合生物樣品分析的要求。 第二部分HPCE-LIF在毒物分析中的應用探討 由于現(xiàn)有的氬原子激光誘導熒光檢測器的激發(fā)波長和發(fā)射波長均固定，分別為488nm和520nm，在此波長下所有的毒物均無熒光吸收，所以必須進行熒光衍生化。通過實驗篩選該波

7、長下衍生化試劑和挑選合適的可反應的毒物，我們以苯丙胺類為代表，優(yōu)化衍生化條件和電泳條件，進行方法學考察。 衍生化反應條件：10mM、pHl0硼酸緩沖體系中，樣品與衍生化試劑的物質(zhì)的量之比n樣品：BFITC=1：10，加入O．1％吡啶／丙酮溶液20gL，避光、室溫反應12h；電泳條件：毛細管50gtm×60cm，20mM、phi2硼砂緩沖液，操作電壓25kV，柱溫25℃。 本方法最大的特點是靈敏度高，尿樣和血樣中的最低檢測