核內(nèi)巨噬細(xì)胞集落刺激因子作用研究.pdf

1、巨噬細(xì)胞集落刺激因子(M-CSF)又稱為集落刺激因子-1,是造血系統(tǒng)重要的細(xì)胞因子.為研究核內(nèi)M-CSF的功能,該文采取定位表達(dá)的方法使M-CSF在細(xì)胞核內(nèi)表達(dá),研究對細(xì)胞功能的影響.該文采用了真核表達(dá)質(zhì)粒pCMV/myc/nuc,該質(zhì)粒在插入片段末端連接三個(gè)核定位信號(NLS)編碼序列,使表達(dá)的重組蛋白C端融合三個(gè)NLS信號肽,賦予重組蛋白強(qiáng)入核信號從而定位表達(dá)于核內(nèi).該文選取兩株永生細(xì)胞系:小鼠成纖維母細(xì)胞系NIH3T3和人EB病毒

2、轉(zhuǎn)化的類淋巴母細(xì)胞系LCL-H,通過轉(zhuǎn)染和G418篩選、建立穩(wěn)定表達(dá)核M-CSF的細(xì)胞系以研究核M-CSF對細(xì)胞生物學(xué)活性的影響.腫瘤細(xì)胞的另一特性是逃逸凋亡.用細(xì)胞毒藥物阿霉素處理細(xì)胞,檢測細(xì)胞表面PS(凋亡)和碘經(jīng)丙錠(PI)染細(xì)胞核(死亡)研究細(xì)胞的調(diào)亡情況.結(jié)果表明LCL-M比對照細(xì)胞的抗凋亡能力高.提供自我生長信號,對生長抑制信號失敏,凋亡逃逸,組織浸潤和轉(zhuǎn)移,持續(xù)的血管新生和無限的復(fù)制增生是惡性細(xì)胞共有的特征.該文對兩種細(xì)胞