生長(zhǎng)抑素類(lèi)似物基因治療胰腺癌的試驗(yàn)研究.pdf

1、本文研究目的：利用攜帶SSTR2基因的重組腺病毒載體Adeno-X-SSTR2轉(zhuǎn)染胰腺癌細(xì)胞株及裸鼠胰腺癌皮下模型，使用SSTR2特異激動(dòng)劑NC-8-12和生長(zhǎng)抑素類(lèi)似物奧曲肽，觀察其在體外、體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中是否能取得抑制胰腺癌細(xì)胞增殖的效果。　　方法：構(gòu)建重組攜帶SSTR2基因的腫瘤增殖缺陷型腺病毒載體Adeno-X-SSTR2，經(jīng)過(guò)擴(kuò)增和純化技術(shù)，在體外分別感染胰腺癌細(xì)胞株MIA-PaCa-2、AsPC-1，觀察不同劑量NC一8一12和

2、奧曲肽(10-aM、10-gM)對(duì)轉(zhuǎn)染和未轉(zhuǎn)染SSTR2基因的胰腺癌細(xì)胞株是否有抑制作用；建立體外轉(zhuǎn)移模型，觀察NC-8．12對(duì)模型中轉(zhuǎn)染了SSTR2基因的胰腺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移能力的影響；RT-PCR法半定量和免疫細(xì)胞學(xué)檢測(cè)不同濃度NC一8一12和奧曲肽(0．10、0．20、0．40、0．80μg／m1)對(duì)胰腺癌細(xì)胞株MIA-PaCa-2轉(zhuǎn)染SSTR2基因前后凋亡抑制蛋白Survivin表達(dá)量的影響；建立裸鼠胰腺癌皮下模型，分為轉(zhuǎn)染和未轉(zhuǎn)染S

3、STR2基因的兩組，皮下分別給予不同劑量NC一8—12和奧曲肽(50、100、200μg／kg／d)，給藥時(shí)間共三周，末次給藥一周后處死裸鼠，設(shè)置鹽水組為對(duì)照組，觀察腫瘤體積和重量的變化；免疫組織化學(xué)法檢測(cè)腫瘤組織內(nèi)SSTR2表達(dá)情況?！　〗Y(jié)果：重組腺病毒載體Adeno-X-SSTR2能高效轉(zhuǎn)染胰腺癌細(xì)胞株MIA-PaCa-2和AsPC—l，轉(zhuǎn)染的兩株胰腺癌細(xì)胞均能表達(dá)SSTR2mRNA及其蛋白；在體外實(shí)驗(yàn)中NC．8—12和奧曲肽對(duì)未

4、轉(zhuǎn)染SSTR2基因胰腺癌細(xì)胞株的生長(zhǎng)無(wú)抑制作用(P>0．05)；在轉(zhuǎn)染了SSTR2基因的胰腺癌細(xì)胞株中，NC-8-12和奧曲肽在10-8M劑量時(shí)可以明顯抑制胰島素引起的腫瘤細(xì)胞增殖(P<0．05)；在體外轉(zhuǎn)移模型中NC-8-12對(duì)轉(zhuǎn)染了SSTR2基因的胰腺癌細(xì)胞株的轉(zhuǎn)移過(guò)程無(wú)抑制作用(P>0．05)；在不同濃度NC一8—12和奧曲肽作用下，未轉(zhuǎn)染SSTR2基因胰腺癌細(xì)胞株的Survivin表達(dá)量無(wú)明顯變化(P>0．05)，轉(zhuǎn)染了SSTR

5、2基因胰腺癌細(xì)胞株的Survivin表達(dá)量明顯下調(diào)(P<0．05)；在裸鼠皮下模型實(shí)驗(yàn)中，NC一8—12和奧曲肽對(duì)未轉(zhuǎn)染SSTR2基因的胰腺癌細(xì)胞無(wú)抑制作用(P>O．05)；在轉(zhuǎn)染了SSTR2基因的胰腺癌細(xì)胞中，NC一8．12和奧曲肽在200ug／kg/d劑量下可以明顯抑制腫瘤細(xì)胞增殖(P<0．05)，在以上實(shí)驗(yàn)中NC．8．12較奧曲肽表現(xiàn)出了更強(qiáng)的抑制腫瘤細(xì)胞增殖及促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡的趨勢(shì)?！　〗Y(jié)論：　　①攜帶SSTR2基因的腫瘤增

6、殖缺陷型腺病毒載體Adeno-X-SSTR2可以高效轉(zhuǎn)染胰腺癌細(xì)胞株MIA-PaCa-2、AsPC0。　?、谠隗w外實(shí)驗(yàn)中，NC一8．12和奧曲肽可以明顯抑制轉(zhuǎn)染了SSTR2基因的胰腺癌細(xì)胞的增殖?！　、跱C-8-12和奧曲肽作用于轉(zhuǎn)染了SSTR2基因的胰腺癌細(xì)胞后，可以明顯下調(diào)Survivin表達(dá)量，這可能是NC一8—12和奧曲肽誘導(dǎo)胰腺癌細(xì)胞凋亡的重要機(jī)制。　?、芤欢▌┝康腘C一8．12和奧曲肽(200ug／kg/d)對(duì)裸鼠體內(nèi)