整合素αVβ3反義基因治療大鼠胰腺癌的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：胰腺癌是一種兇險(xiǎn)的惡性腫瘤，發(fā)病率有逐年上升趨勢(shì)，近30年來(lái)發(fā)病率己增長(zhǎng)3～7倍。其血供豐富，靜脈和淋巴引流途徑較多，腫瘤生長(zhǎng)迅速，易侵犯周邊器官及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，單一化療或放療效果不理想，所以針對(duì)易侵襲因素的靶向治療將可能提高胰腺癌的治愈率及改善預(yù)后。腫瘤血管生成不僅與腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，而且在腫瘤病理分級(jí)、治療和預(yù)后判斷上具有重要的評(píng)估價(jià)值。研究表明，細(xì)胞粘附分子介導(dǎo)的細(xì)胞粘附行為異常在腫瘤的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移中有重要作用。近年，隨著

2、免疫和分子生物學(xué)的發(fā)展，腫瘤血管生成及抗血管生成逐漸成為腫瘤研究的重點(diǎn)和熱點(diǎn)之一，細(xì)胞粘附分子與血管生成的關(guān)系也日益受到關(guān)注<'[2]>。研究發(fā)現(xiàn)，整合素αV β3不僅在多種實(shí)體腫瘤細(xì)胞表面不同水平的表達(dá)，而且在血管內(nèi)皮細(xì)胞不同程度的表達(dá)α Vβ 3、α V β5、β1、α 3、α 2、α 6、β4等<'[3]>。因此，選擇整合素α V β3的反義基因、單克隆抗體或者拮抗肽，來(lái)治療腫瘤的實(shí)驗(yàn)是近年腫瘤研究的一個(gè)熱點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)旨在研究整合素

3、αV β3反義基因治療大鼠胰腺癌的療效，以及對(duì)胰腺癌血管生成及細(xì)胞凋亡的影響，進(jìn)一步探討整合素α V β3在腫瘤發(fā)生、發(fā)展中的作用，為胰腺癌的治療提供新的思路。 方法：把αV β3反義基因表達(dá)載體AlphaV/pcDNA3、Beta3/pcDNA3轉(zhuǎn)入感受態(tài)細(xì)菌，細(xì)菌擴(kuò)大培養(yǎng)，質(zhì)粒大提后酶切鑒定。4周齡雄性大鼠120只，隨機(jī)分為4組，每組30只。大鼠胰腺被膜下包埋二甲基苯葸線結(jié)，建立胰腺癌模型。6周后病例證實(shí)成瘤，并采用瘤內(nèi)注射

4、質(zhì)粒電轉(zhuǎn)染方法，每組分別用α V、β3及αV β3的反義基因進(jìn)行基因治療(對(duì)照組注射空殼質(zhì)粒)，觀察腫瘤生長(zhǎng)情況，記錄腫瘤大小。6周后切取腫瘤秤重，計(jì)算抑瘤率。采用免疫組織化學(xué)S-P法分別檢測(cè)α V、β3蛋白以及的表達(dá)，計(jì)數(shù)微血管密度(microvessel density，MVD)。采用 TUNEL 法 (TdT-mediated biotinylated-dUTP nick end labling method)檢測(cè)各組的細(xì)胞凋亡情

5、況，并計(jì)算凋亡指數(shù)(apoptosis index，AI)。并對(duì)各組間αV、β3蛋白以及MVD、AI進(jìn)行比較。 結(jié)果：(1)各組腫瘤體重有明顯差異，對(duì)照組，αV，β3及αV β3組瘤重分別為1.167±0.79g，0.953±0.26g，1.013±0.42g，0.788±0.56g。αV、β3及αV β3組與對(duì)照組比較有明顯差異(P<0.01)；αV β3組與αV組和β3組比較有差異(P<0.05)。αV、β3及αVβ3組的抑

6、瘤率分別為17.909﹪，13.196﹪，32.476﹪。 (2)αV、β3蛋白在實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組中均有表達(dá)，對(duì)照組13例中有12例表達(dá)陽(yáng)性，陽(yáng)性率為92.31﹪，αV組、β3組的表達(dá)率為76.92﹪、80.00﹪，與對(duì)照組比較陽(yáng)性分布有差異(P<0.01)。 (3) 對(duì)照組、αV組、β3組、αV β3組微血管密度計(jì)數(shù)分別為18.333±1.398、13.800±1.063、15.967±1.245、12.66±1.234

7、，實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組比較有顯著差異(19<0.01)；αV β3組與αV組和β3組比較有差異(P<0.05)。 (4)細(xì)胞的凋亡指數(shù)(AI)對(duì)照組、αV組、β3組、αV β3組分別為12.300±1.393﹪， 22.167±1.234﹪，20.367±1.066﹪，24.100±0.995﹪，αV組、β3組、αV β3組與對(duì)照組比較有極顯著差異(P<0.01)；αV β3組與αV組和β3組組間比較比較有差異(P<0.05)。