應(yīng)用組織芯片研究喉鱗癌和癌前病變中mdm2、P73蛋白表達(dá)及其與P53蛋白表達(dá)的關(guān)系.pdf

1、目的 近二十年來(lái)，外科手術(shù)和放化療技術(shù)的進(jìn)步并沒(méi)有顯著的提高喉癌患者特別是晚期喉癌患者的生存率，患者的復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移與其免疫、腫瘤生物學(xué)特性有關(guān)，因此了解腫瘤的分子生物學(xué)特性，和新的腫瘤特異性標(biāo)志物，以便于腫瘤的早期診斷，早期干預(yù)和基因治療。腫瘤的發(fā)生發(fā)展是一個(gè)多因素多基因多步驟的過(guò)程，包括染色體的畸變，癌基因和抑癌基因的突變，細(xì)胞周期的紊亂以及凋亡的失控等過(guò)程。本實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖鞘褂梦㈥嚵屑夹g(shù)研究喉癌和癌前病變標(biāo)本中mdm2和P73蛋白的

2、表達(dá)改變，并與P53蛋白的表達(dá)相互比較，分析其和腫瘤惡性度和臨床表現(xiàn)、臨床分期、病理分級(jí)的關(guān)系，從而為喉癌的診斷和治療提供理論依據(jù)。 材料與方法： 85例喉癌標(biāo)本取自1990年4月至2000年12月底于我院耳鼻喉科手術(shù)治療的喉癌患者，男性80例，女性5例年齡36-83歲，中位年齡64歲。所有患者術(shù)前均未行放療或化療。病理證實(shí)均為喉鱗狀細(xì)胞癌。腫瘤臨床分期：為Ⅰ期17例，Ⅱ期30例，Ⅲ期19例，Ⅳ期18期。病理分型：高分化

3、65例，中分化18例，低分化2例。其中T118例，T233例，T321例，T13例，經(jīng)病理檢查證實(shí)發(fā)生頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者17例，無(wú)頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者68例。聲門(mén)型50例，聲門(mén)上型33例，聲門(mén)下型2例。對(duì)照取同期我院手術(shù)后病理證實(shí)喉聲帶癌前病變組織或者良性病變56例，其中喉鱗狀上皮輕度不典型增生15例，中度不典型增生9例，重度不典型增生3例，肉芽組織2例，喉角化病2例，喉乳頭狀瘤3例，聲帶息肉22例。 組織芯片由上海市腫瘤研究所協(xié)助制作；

4、組織微陣列儀(tissuearrayer)：美國(guó)BEECHERINSTRUMENTS公司產(chǎn)品，由上海市腫瘤研究所提供。 以免疫組化二步法檢測(cè)組織芯片mdm2蛋白和P73蛋白的表達(dá)，，并與數(shù)據(jù)庫(kù)P53蛋白的表達(dá)相比較(同一微陣列的前期實(shí)驗(yàn)結(jié)果)。用STATA8．0SE軟件行統(tǒng)計(jì)分析。 結(jié)果： 1、MDM2組織微陣列中樣本丟失情況 MDM2組織微陣列蠟塊中標(biāo)本85個(gè)，經(jīng)切片和免疫組化染色后脫片或者染色后未見(jiàn)腫

5、瘤細(xì)胞結(jié)構(gòu)8例，實(shí)際獲得分析樣本77個(gè)。對(duì)照組經(jīng)過(guò)切片和免疫組化染色后脫片或者染色后無(wú)細(xì)胞結(jié)構(gòu)12例，實(shí)際獲得對(duì)照組樣本33個(gè)。 2、MDM2蛋白在不同組織中的染色情況 77例喉癌組織中MDM2蛋白定位于胞核及胞漿中，顆粒較粗，染色從淺黃色、黃色、深黃色、棕色不等，呈出現(xiàn)彌漫性或局限性分布。結(jié)果顯示在77例喉癌組織中有62例喉癌鱗狀細(xì)胞癌中有MDM2蛋白的表達(dá)，陽(yáng)性率為：80．52％，其中強(qiáng)陽(yáng)性(+++)13例，陽(yáng)性(+

6、+)22例，弱陽(yáng)性(+)27例，陰性(-)15例。癌前病變組中MDM2染色陽(yáng)性率為：63．6％(14／22)，聲帶息肉組MDM2染色陽(yáng)性率為：54．5％(6／11)，經(jīng)過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)，差異有顯著性。 3、MDM2蛋白表達(dá)與喉癌組織病理分級(jí)、臨床分期及頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系 MDM2蛋白的表達(dá)強(qiáng)度在不同分化程度臨床分期不同臨床分型組間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；MDM2蛋白在不同淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組間的表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。MDM2蛋白的表達(dá)在

7、不同性別組間和不同香煙消費(fèi)組間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。手術(shù)后三年生存組的MDM2蛋白表達(dá)陽(yáng)性率(41／52)低于手術(shù)后未能生存三年組(21／25)，但是二者的差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。酗酒患者組MDM2蛋白的表達(dá)率71．88％(23／32)低于不酗酒組86．67％(39／45)，二者的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 4、P73組織微陣列中樣本丟失情況 P73組織微陣列蠟塊中標(biāo)本85個(gè)，經(jīng)切片和免疫組化染色后脫片或者染色后未見(jiàn)腫瘤細(xì)胞結(jié)構(gòu)15例，

8、實(shí)際獲得分析樣本70個(gè)。對(duì)照組56例經(jīng)過(guò)切片和免疫組化染色后脫片或者染色后無(wú)細(xì)胞結(jié)構(gòu)21例，實(shí)際獲得對(duì)照組樣本35個(gè)。 5、P73蛋白在不同組織中的染色情況 70例喉癌組織中P73蛋白定位于胞核及胞漿中，顆粒較粗，染色從淺黃色、黃色、深黃色、棕色不等，呈出現(xiàn)彌漫性或局限性分布。結(jié)果顯示在70例喉癌組織中有33例喉癌鱗狀細(xì)胞癌中有P73蛋白的表達(dá)，陽(yáng)性率為：47．1％(33／70)，癌前病變組中P73蛋白表達(dá)陽(yáng)性率為50．

9、0％(11／22)，聲帶息肉組P73蛋白表達(dá)陽(yáng)性率為615％(8／13)癌前病變組，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P)0．05)。 6、P73蛋白表達(dá)與喉癌組織病理分級(jí)、臨床分期及頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系 P73蛋白的表達(dá)在不同臨床分期不同、臨床分型組間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義：P73蛋白在不同淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組間的表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。P73蛋白的表達(dá)在不同性別組間和不同香煙消費(fèi)、不同酒精消費(fèi)組間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。手術(shù)后三年生存組的P

10、73蛋白表達(dá)陽(yáng)性率(22／45)高于手術(shù)后未能生存三年組(10／25)，但是二者的差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 7、P73蛋白,P53蛋白，MDM2蛋白表達(dá)的相關(guān)性 經(jīng)過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)，不同P73染色組間MDM2染色差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P73陽(yáng)性組的MDM2表達(dá)強(qiáng)度明顯高于P73陰性組，而P53與P73，P53與MDM2的表達(dá)無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義上的相關(guān)。 結(jié)論： 1、MDM2蛋白在喉鱗狀細(xì)胞癌中普遍表達(dá)，而且MDM2蛋