川牛膝種質資源評價研究.pdf

1、川牛膝為川產道地常用中藥，來源于莧科杯莧屬多年生草本植物川牛膝Cyathula officinalis Kuan的干燥根。臨床用于治療血滯經閉，風濕痹痛，跌打損傷。但是由于長期栽培管理粗放、品種退化和混雜等因素，導致藥材品質下降。
　　一、川牛膝道地產區(qū)資源調查
　　通過對四川川牛膝3個道地產區(qū)的實地調查，得到不同產地生態(tài)環(huán)境，品種混雜情況，生產狀況、銷售價格等資料。發(fā)現川牛膝品種混雜嚴重，傳統(tǒng)種植地廢棄。目前產區(qū)主要品種有

2、川牛膝（又稱白牛膝、甜牛膝）來源于杯莧屬植物川牛膝C.officinalis Kuan；麻牛膝（又稱紅牛膝）來源于杯莧屬植物頭花杯莧 C.capitata Mop；雜牛膝（川牛膝與頭花杯莧的自然雜交種）來源于C.officinalis*C.capitata。
　　二、川牛膝遺傳多樣性研究
　　初步評價道地產區(qū)川牛膝的遺傳多樣性。應用ISSR分子標記對川牛膝主產地6個居群，23份樣本進行了植物性狀及遺傳多樣性研究。經過引物篩選

3、試驗選出4個呈現多態(tài)性的引物，平均擴增條帶數為10.75條，總共擴增條帶數為43條，占總擴增條帶數的67.4％。POPGENE分析結果表明，川牛膝具有豐富的遺傳變異(在物種水平上， He=0.1892， PPL=67.4%， Ho=0.3224；在居群水平上， He=0.717，PPL=49.76%， Ho=0.2509)。居群遺傳距離的變化范圍分別為0.52～1.00。得到四川主產地川牛膝物種間遺傳多樣性較大，居群間遺傳多樣性較小，遺

4、傳變異主要川牛膝居群內基因流漂移。
　　三、川牛膝種子研究
　　川牛膝一般生長于海拔1500 m～2500 m地區(qū)。隨著海拔的降低川牛膝發(fā)芽率明顯降低。通過對川牛膝種子的含水量、生活力、千粒重及健康度進行測定，為川牛膝種子的質量控制提供有效地依據。研究不同激素、浸種時間與溫度對川牛膝種子萌發(fā)的影響。吲哚乙酸不同濃度處理川牛膝種子，能夠顯著提高其發(fā)芽率與發(fā)芽勢。
　　四、川牛膝根的生長發(fā)育及顯微構造研究
　　發(fā)現川

5、牛膝隨著年限的增加其三生維管束輪數、個數均在3年達到高峰，川牛膝三生維管束通?？蛇_4～8輪，每輪有每輪有30～60個三生維管束，遠高于一年生川牛膝。川牛膝及其混雜品種在三生維管束個數等方面均有較大差異。
　　五、川牛膝農藝性狀與花形態(tài)結構研究
　　通過對不同種源川牛膝農藝性狀進行分析，發(fā)現在株高、莖周長、冠幅、葉長、葉寬、單株鮮根重、根長、根分支數、根周長、折干率均有顯著差異。對川牛膝的花形態(tài)結構進行解剖，發(fā)現不同種源川牛膝

6、在雄蕊個數、雄蕊顏色、雄蕊形狀、胚珠、干花顏色都有一定差別。
　　六、川牛膝質量評價研究
　　(1)多糖含量測定方法研究
　　建立了川牛膝多糖的含量測定方法；發(fā)現同等年限的川牛膝多糖含量較雜牛膝、麻牛膝更高；隨著年限的增加，川牛膝多糖類物質的積累也在增加。
　　(2)川牛膝杯莧甾酮含量測定
　　對32批川牛膝進行含量測定，得到三年生川牛膝平均杯莧甾酮含量為0.065%、雜牛膝為0.057%，麻牛膝為0.03

7、3%，明顯低于川牛膝和雜牛膝。1年生川牛膝平均杯莧甾酮含量僅為0.020%，2年生為0.031%且部分達不到0.030%，3年生、4年生川牛膝杯莧甾酮含量分別為0.058%、0.061%，表明隨著年限增加杯莧甾酮的積累也在增加，到三年逐漸趨于穩(wěn)定。
　　(3)川牛膝指紋圖譜研究
　　通過32批樣品建立川牛膝的HPLC指紋圖譜共有模式圖，標定13個共有峰，其中指認4號峰為阿魏酸，5號峰為杯莧甾酮，10號峰為齊墩果酸，其中以5號

8、峰作為參比峰。經研究發(fā)現，川牛膝7、8、9、10號共有峰的平均峰面積之和占總峰面積的0.48%，9號峰占參比峰的0.17%；雜牛膝共有峰的平均峰面積之和占總峰面積的的30.46%，9號峰占參比峰的2.36%；麻牛膝共有峰的平均峰面積之和占總峰面積的63.56%，9號峰占參比峰的945.5%。其中雜牛膝、麻牛膝的特有峰T1、T2平均峰面積占總峰面積分別為15.3%、19.6%。說明該化學物質對整個雜牛膝、麻牛膝化學成分影響非常大。

9、　　七、川牛膝質量的多因素關聯(lián)性分析
　　對以上川牛膝杯莧甾酮含量、生態(tài)環(huán)境、農藝性狀、顯微特征進行灰色關聯(lián)度分析。分析表明，川牛膝杯莧甾酮的積累與葉的運輸有著重要的聯(lián)系(葉寬＞葉長＞灌幅＞單株鮮根重＞莖周長＞根分支數＞根長＞株高＞根周長)，此外還受到葉的光合作用的影響；與海拔、降水量等生態(tài)因子與也存在重要聯(lián)系(海拔＞年降水量＞平均相對濕度＞年蒸發(fā)量＞年平均日照＞10℃的有效積溫＞年均氣溫)；此外還與川牛膝根栓內層厚度有著重要的聯(lián)