白背毛木耳多糖純化、修飾及抗腫瘤活性研究.pdf

1、白背毛木耳隸屬于真菌門、擔子菌綱、木耳目、木耳科，生于熱帶、亞熱帶地區(qū)，在溫暖、潮濕季節(jié)叢，全國范圍內分布廣泛。多糖作為白背毛木耳的主要功能性成分，具有抗氧化、抗癌、降血糖和降血脂等多種生理活性，因此，白背毛木耳多糖（APP）可以開發(fā)成臨床藥物及保健品，市場前景廣闊。
　　本文以白背毛木耳為原料，確定了APP的超聲-微波輔助提取最佳工藝參數，考察了APP的流變特性及理化性質，對APP進一步分離純化，篩選出抗腫瘤活性強的組分APP3

2、a，對其進行羧甲基化修飾，探討最佳修飾工藝，并探討了羧甲基化修飾前后多糖的抗腫瘤活性，主要的研究結果如下：
　　1.通過響應面法優(yōu)化確定超聲-微波輔助提取APP的最佳工藝參數：液料比22(mL/g)，時間15 min，微波功率60 W，在該條件下，多糖得率為4.13％，純度為47.98%。
　　2. APP為白色絮狀物，無味，能溶于水，不溶于乙醇、甲醇、丙酮等有機溶劑，不含蛋白質和酚類物質。流變特性研究表明APP的黏度隨其濃

3、度的增大而升高，在一定溫度范圍內，隨其溫度的升高而降低。當APP濃度大于0.5%時，其黏度隨剪切速率的增加而減小，出現“剪切稀化”現象，表現為“非牛頓流體”，且具有“假塑性”。pH對APP黏度的影響較大，加熱時間、凍融變化、金屬離子和蔗糖添加量對其黏度的影響較小。
　　3.對APP進行純化并對其組分進行抗腫瘤活性篩選，經DEAE-52 cellulose柱分離純化得到4個多糖組分：APP1為中性多糖，APP2、APP3和APP4為

4、酸性多糖，多糖回收率為87.6%。對四個組分進行體外抗腫瘤活性篩選，篩選出抗腫瘤活性較高的組分APP3。APP3經過Sephadex G-200凝膠色譜柱洗脫分離，得到單一組分APP3a，HPLC鑒定表明APP3a為均一組分。APP3a的相對分子質量為21242 Da，單糖組成為Ara、Man、Glc、Gal，其摩爾比為1：1.33：1.06：1.23。熱重分析表明APP3a在160-500℃之間發(fā)生分解，出現快速失重。
　　4.

5、研究了APP3a羧甲基修飾的工藝及其體外抗腫瘤活性。確定APP3a羧甲基修飾最佳修飾工藝參數為：APP3a60 mg，介質為異丙醇，氯乙酸1.45 g， NaOH量2.48 g，反應溫度55℃，反應時間3.5 h，在該工藝條件下，CM-APP3a取代度為0.892。體外抗腫瘤活性研究表明APP3a和CM-APP3a處理48 h均能抑制HepG2細胞的生長，且隨著APP3a和CM-APP3a濃度的增大，抑制作用越大，呈現劑量效應關系，在濃

6、度為800 mg/mL時，APP3a和CM-APP3a對HepG2細胞生長的抑制作用最大。在相同濃度和處理時間條件下，CM-APP3a對HepG2細胞生長的抑制作用高于APP3a。APP3a和CM-APP3a在25-800mg/mL濃度范圍內，處理48 h均能誘導HepG2細胞的凋亡，且隨著APP3a和CM-APP3a濃度的增大，細胞凋亡率越大。在APP3a和CM-APP3a濃度為800 mg/mL時，細胞凋亡率分別為19.65%和35