毛細(xì)管電泳高效分離、高靈敏度檢測方法的研究.pdf

1、在施加電場的作用下，一些帶電物質(zhì)在通過毛細(xì)管的過程中可實現(xiàn)分離，基于這個原理，毛細(xì)管電泳可以用來檢測許多物質(zhì)，包括無機(jī)物和生物大分子。毛細(xì)管電泳已日益成為一個強(qiáng)大和通用的分析分離技術(shù)，它具有很多誘人的特征，譬如高效、快速、微量、經(jīng)濟(jì)、應(yīng)用面廣等?，F(xiàn)今，毛細(xì)管電泳作為高效液相色譜的有益補(bǔ)充廣泛地應(yīng)用于日常分析，并在化學(xué)、藥學(xué)和生命科學(xué)等領(lǐng)域均得到了廣泛深入的發(fā)展。本文旨在構(gòu)建“高分離柱效、高靈敏度”的分析策略，建立基于高效快速分離、高靈敏

2、度檢測的毛細(xì)管電泳優(yōu)化方法，并將其應(yīng)用到實際生物樣品的分析中。本論文分為四個部分。
　　 第一部分簡要回顧了毛細(xì)管電泳（CE）的發(fā)展歷史，對毛細(xì)管電泳技術(shù)的基本理論、分離模式、應(yīng)用特點以及聯(lián)用檢測技術(shù)等進(jìn)行了介紹。著重討論了毛細(xì)管電泳的發(fā)展熱點。最后，以方法的建立、完善、優(yōu)化為出發(fā)點，提出了本論文的研究內(nèi)容。
　　 第二部分報道了自建毛細(xì)管電泳-電化學(xué)檢測系統(tǒng)分離測定柚（苷）配基、蘆丁、槲皮素三種黃酮類化合物以及抗壞血酸

3、含量的方法。對影響分離分析的實驗參數(shù)如緩沖液種類、濃度、pH值，檢測電位，分離電壓等進(jìn)行了詳細(xì)考察，得到最佳實驗條件：以24 mmol/L，硼酸鹽緩沖溶液為運行介質(zhì)，18 kV電壓下，5 min內(nèi)實現(xiàn)基線分離，自制石墨碳圓盤電極于+0.9 V電位下實現(xiàn)檢測。柚（苷）配基、蘆丁、槲皮素和抗壞血酸的檢測限分別為1.0μM，8.0μM，0.5μM和2.0μM。方法成功應(yīng)用于SD大鼠血清和糞便樣品的分析測定，回收率均在90.9％-108.6％之

4、間。該方法為黃酮類化合物在生物體內(nèi)的代謝研究提供了一種新方法的借鑒。
　　 第三部分建立了一種修飾毛細(xì)管電泳-紫外吸收快速分離測定柚苷、蘆丁、槲皮素和抗壞血酸的方法。采用動態(tài)修飾和層層組裝修飾涂層技術(shù)，將納米二氧化硅（SiNPs）、聚離子電解質(zhì)（PDDA、PSS）用于毛細(xì)管修飾改性。實驗發(fā)現(xiàn)，PDDA-SiNPs-PSS層層組裝涂層CE能顯著改善柚苷、蘆丁、槲皮素和抗壞血酸的峰型，提高柱效和分離度。毛細(xì)管經(jīng)PDDA-Si-PSS

5、組裝修飾后，四種分析物在14min內(nèi)實現(xiàn)了基線分離。本方法用于尿樣中痕量柚苷、蘆丁、槲皮素和抗壞血酸的分析測定，四個分析物分別在5～150μM，5～150μM，5～175μM和0.12～3.6 mM的濃度范圍內(nèi)呈良好線性，檢出限為1.4μM，1.3μM，0.8μM，17μM。該方法的提出為修飾毛細(xì)管電泳在實際生物樣品分析中的應(yīng)用提供了理論與實踐基礎(chǔ)。
　　 第四部分基于電化學(xué)發(fā)光檢測靈敏度高、選擇性好的優(yōu)點，進(jìn)行了毛細(xì)管電泳-流