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文檔簡(jiǎn)介
1、研究背景:
胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白相關(guān)蛋白1(insulin-like growth factor bindingprotein related protein1,IGFBPrP1)是1993年由美國(guó)學(xué)者M(jìn)urphy從正常的人軟腦膜細(xì)胞和乳腺上皮細(xì)胞中分別克隆出的一種可溶性細(xì)胞黏附糖蛋白,主要在肝臟分泌,激活的肝星狀細(xì)胞(hepatic stellate cell,HSC)是IGFBPrP1主要的來(lái)源細(xì)胞。IGFBPrP
2、1基因定位于人類(lèi)染色體4q12,編碼一組含有282個(gè)氨基酸殘基的前體蛋白。目前研究表明,IGFBPrP1主要具有兩個(gè)功能:一是它具有依賴胰島素樣生長(zhǎng)因子(insulin-like growth factor,IGFs)的功能,IGFBPrP1在血管中參與運(yùn)輸IGFs,延遲IGFs的半衰期,調(diào)控IGFs的清除率,調(diào)控IGFs與IGFs受體的結(jié)合,從而間接和直接地調(diào)控IGFs的生物活性;其次,IGFBPrP1還具有不依賴IGFs的功能,它是
3、一種典型的腫瘤生長(zhǎng)抑制因子。
導(dǎo)師前期研究發(fā)現(xiàn),IGFBPrP1具有致肝纖維化作用;且將重組小鼠IGFBPrP1(rm IGFBPrP1)經(jīng)腹腔注入C57BL/6野生型小鼠體內(nèi),研究結(jié)果表明外源性IGFBPrP1對(duì)肝臟有直接的致纖維化作用。但是,腹腔注射IGFBPrP1在大鼠體內(nèi)其半衰期短,代謝快,藥物利用率低;腹腔注射給藥要經(jīng)過(guò)腸系膜靜脈吸收后逐步進(jìn)入體循環(huán),作用緩慢,不利于了解IGFBPrP1的蛋白功能。有沒(méi)有更快速有
4、效的方法來(lái)研究IGFBPrP1對(duì)大鼠肝組織的影響?為了闡明此問(wèn)題,設(shè)計(jì)了本課題。
目的:
明確腺病毒包裝的胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白相關(guān)蛋白1是否能導(dǎo)致大鼠肝纖維化。
方法:
清潔級(jí)雄性SD大鼠24只,6-8周齡,體重200-250克,隨機(jī)分為3組:正常組:8只,自由喂養(yǎng),無(wú)其它處理。
陰性對(duì)照組(Ad-GFP組):8只,尾靜脈注射Ad-GFP,2.5×109pfu,首
5、日注射1次。
Ad-IGFBPrP1組:8只,尾靜脈注射Ad-IGFBPrP1,2.5×109pfu,首日注射1次。
4周后處死動(dòng)物,10%中性甲醛固定后取肝組織行HE染色:觀察各組大鼠肝臟組織學(xué)形態(tài)。免疫組織化學(xué)染色觀察α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SMA)(HSC活化的標(biāo)志蛋白)、纖維連接蛋白(Fibronectin,F(xiàn)n)在肝組織的表達(dá)。
結(jié)果:
(1) HE染色分析結(jié)果:正常組和
6、Ad-GFP組可見(jiàn)肝小葉結(jié)構(gòu)完整,肝細(xì)胞排列規(guī)則。而Ad-IGFBPrP1組中肝組織結(jié)構(gòu)紊亂,肝細(xì)胞大量水腫變性,少數(shù)肝細(xì)胞核固縮、碎裂,可見(jiàn)纖維結(jié)締組織增生明顯。
(2)免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示:與正常組或Ad-GFP組相比,Ad-IGFBPrP1組肝組織中α-SMA、Fn的表達(dá)顯著增強(qiáng)(α-SMA:3.10±0.13 vs0.19±0.03,3.10±0.13 vs0.19±0.03,F=477.927, P<0.01
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