腺病毒包裝的胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白相關(guān)蛋白1對大鼠肝組織的影響.pdf

1、研究背景:
　　 胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白相關(guān)蛋白1(insulin-like growth factor bindingprotein related protein1，IGFBPrP1)是1993年由美國學(xué)者Murphy從正常的人軟腦膜細胞和乳腺上皮細胞中分別克隆出的一種可溶性細胞黏附糖蛋白，主要在肝臟分泌，激活的肝星狀細胞(hepatic stellate cell，HSC)是IGFBPrP1主要的來源細胞。IGFBPrP

2、1基因定位于人類染色體4q12，編碼一組含有282個氨基酸殘基的前體蛋白。目前研究表明，IGFBPrP1主要具有兩個功能:一是它具有依賴胰島素樣生長因子(insulin-like growth factor，IGFs)的功能，IGFBPrP1在血管中參與運輸IGFs，延遲IGFs的半衰期，調(diào)控IGFs的清除率，調(diào)控IGFs與IGFs受體的結(jié)合，從而間接和直接地調(diào)控IGFs的生物活性;其次，IGFBPrP1還具有不依賴IGFs的功能，它是

3、一種典型的腫瘤生長抑制因子。
　　 導(dǎo)師前期研究發(fā)現(xiàn)，IGFBPrP1具有致肝纖維化作用;且將重組小鼠IGFBPrP1(rm IGFBPrP1)經(jīng)腹腔注入C57BL/6野生型小鼠體內(nèi)，研究結(jié)果表明外源性IGFBPrP1對肝臟有直接的致纖維化作用。但是，腹腔注射IGFBPrP1在大鼠體內(nèi)其半衰期短，代謝快，藥物利用率低;腹腔注射給藥要經(jīng)過腸系膜靜脈吸收后逐步進入體循環(huán)，作用緩慢，不利于了解IGFBPrP1的蛋白功能。有沒有更快速有

4、效的方法來研究IGFBPrP1對大鼠肝組織的影響？為了闡明此問題，設(shè)計了本課題。
　　 目的:
　　 明確腺病毒包裝的胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白相關(guān)蛋白1是否能導(dǎo)致大鼠肝纖維化。
　　 方法:
　　 清潔級雄性SD大鼠24只，6-8周齡，體重200-250克，隨機分為3組:正常組:8只，自由喂養(yǎng)，無其它處理。
　　 陰性對照組(Ad-GFP組):8只，尾靜脈注射Ad-GFP，2.5×109pfu，首

5、日注射1次。
　　 Ad-IGFBPrP1組:8只，尾靜脈注射Ad-IGFBPrP1，2.5×109pfu，首日注射1次。
　　 4周后處死動物，10％中性甲醛固定后取肝組織行HE染色:觀察各組大鼠肝臟組織學(xué)形態(tài)。免疫組織化學(xué)染色觀察α-平滑肌肌動蛋白(α-SMA)(HSC活化的標(biāo)志蛋白)、纖維連接蛋白(Fibronectin，F(xiàn)n)在肝組織的表達。
　　 結(jié)果:
　　 (1) HE染色分析結(jié)果:正常組和

6、Ad-GFP組可見肝小葉結(jié)構(gòu)完整，肝細胞排列規(guī)則。而Ad-IGFBPrP1組中肝組織結(jié)構(gòu)紊亂，肝細胞大量水腫變性，少數(shù)肝細胞核固縮、碎裂，可見纖維結(jié)締組織增生明顯。
　　 (2)免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示:與正常組或Ad-GFP組相比，Ad-IGFBPrP1組肝組織中α-SMA、Fn的表達顯著增強（α-SMA:3.10±0.13 vs0.19±0.03，3.10±0.13 vs0.19±0.03,F=477.927, P＜0.01