胰島素樣生長因子結合蛋白-4(IGFBP-4)基因的克隆、表達與蛋白純化.pdf

1、胰島素樣生長因子(insulin-like growth factors，簡稱IGFs)，又稱類胰島素樣生長因子，是一類多功能細胞增殖調控因子。胰島素樣生長因子系統(tǒng)由IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ、Ⅰ型和Ⅱ型胰島素樣生長因子受體(insulin-like growth factor receptor，IGFR)以及與IGF特異性結合的胰島素樣生長因子結合蛋白(insulin like growth factor binding protein，

2、IGFBP)家族組成，在正常細胞增生和惡性轉化過程中發(fā)揮重要作用。而胰島素樣生長因子結合蛋白(IGFBP)是IGF的運輸和儲存形式，IGF通常與結合蛋白一起產生和分泌，因而IGFBP對于調節(jié)游離IGF的濃度及其與受體的結合起著重要作用。 在已發(fā)現(xiàn)的10種胰島素樣生長因子結合蛋白(IGFBP1-10)中IGFBP-4是分子量最小的，是一個細胞增殖抑制因子，最初是從人的成骨細胞的條件培養(yǎng)液中分離純化出來的，IGFBP-4主要作用有：

3、調節(jié)IGF的作用、在特定的細胞基質中儲存IGF、不依賴IGF而發(fā)揮作用。 為了獲取大量的高純度的IGFBP-4、降低其生產成本、研究其蛋白功能和體內IGFBP-4的調控機制奠定基礎。采用基因重組表達是獲得大量目的蛋白的主要途徑，本研究將用化學合成法合成IGFBP-4基因片段，通過PCR對其進行擴增，并構建載體與該目的基因相連接，插入pGEX-6p-1融合蛋白表達載體中，構建重組質粒pGEX/-6p-1-IGFBP-4。經轉化宿主

4、菌BL21，篩選高效率轉化子，搖瓶培養(yǎng)，將所構建的IGFBP-4表達質粒，經IPTG(isopropyl-1-thio-beta-D-galactoside)誘導表達，收集細胞裂解、SDS-PAGE電泳檢測結果表明，IGFBP-4成功獲得表達。進一步對誘導時間、誘導溫度和培養(yǎng)基pH值進行優(yōu)化，通過SDS-PAGE檢測確定了最適表達條件為16℃，pH9.5，20h，0.2mM IPTG，此條件下上清目的蛋白的表達總量最高，表明IGFBP-