EGCG對小鼠肝缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及機(jī)制.pdf

1、目的:觀察表沒食子兒茶素沒食子酸酯[(-)-Epigallocatechin-3-gallate，EGCG]對Balb/c小鼠肝缺血再灌注損傷的保護(hù)性作用，研究其作用與血紅素氧合酶-1(Hemeoxygenase-1，HO-1)、Toll樣受體-4(Toll-like receptor4，TLR4)/核因子kappa B P65(Nuclear fator-κB P65，NF-κB P65)及相關(guān)信號分子的關(guān)系，探討其作用機(jī)制。

2、　　方法:健康雄性Balb/c小鼠18只，隨機(jī)分3組(n=6)，分別為:假手術(shù)組（Sham組）、缺血再灌注組(IR組)和I/R+EGCG處理組（EGCG組）。各組分別于再灌注末摘除眼球取血樣，處死小鼠、收集肝組織。測定血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)水平;缺血再灌注肝組織蘇木素-伊紅(Hematoxylin-Eosine，HE)染色后光鏡下觀察其病理學(xué)改變;免疫組織化學(xué)測定TLR4、HO-1和NF-κB P65蛋白的表達(dá)

3、量;Western Blot進(jìn)一步驗(yàn)證TLR4、HO-1和NF-κB P65蛋白水平表達(dá)的變化;Real time-PCR檢測EGCG作用后小鼠左外葉肝組織中TLR4、HO-1、IL-1β、IL-6及TNF-α等信號分子mRNA表達(dá)水平的變化。
　　結(jié)果:經(jīng)EGCG預(yù)處理后，EGCG組血清AST、ALT水平較I/R組均明顯降低[（823.00±200.25）vs（1143.33±268.66），（715.33±159.15）vs（

4、1295.00±214.39），P＜0.05]，與Sham組比較，EGCG組血清AST、ALT水平均顯著升高[（823.00±200.25）vs（349.00±39.24），（715.33±159.15）vs（205.00±28.35），P＜0.01]。從病理學(xué)上觀察，根據(jù)Suzuki評分標(biāo)準(zhǔn)，EGCG組（6.50±1.05）顯著高于Sham組（0.43±0.38）(P＜0.01)，I/R組（8.17±1.47）明顯高于EGCG組（6.

5、50±1.05）(P＜0.05)，EGCG組血再灌注肝組織損傷程度明顯小于IR組，但較Sham組顯著增大。依據(jù)Soslow評分標(biāo)準(zhǔn)對免疫組化結(jié)果進(jìn)行評分:Sham組、EGCG組、 I/R組TLR4指標(biāo)得分分別為2.83±0.98分、5.67±1.51分、8.33±2.25分，Sham組、I/R組、EGCG組指標(biāo)得分分別為3.00±0.98分、6.67±1.97分、9.00±1.55分，Sham組、I/R組、EGCG組HO-1指標(biāo)得分分別

6、為2.92±0.85分、6.56±1.44分、9.43±2.31分，與I/R組比較，EGCG組TLR4、NF-kB P65蛋白表達(dá)量明顯降低(P＜0.05)，EGCG組HO-1蛋白表達(dá)量明顯升高(P＜0.05);與Sham組比較，EGCG組TLR4、NF-kB P65蛋白表達(dá)量顯著增高（P＜0.01），EGCG組HO-1蛋白表達(dá)量明顯增高(P＜0.01)。以β-actin為內(nèi)參照，WesternBlot結(jié)果示，EGCG組HO-1蛋白相對

7、表達(dá)量明顯高于I/R組[（0.90±0.06）vs（0.71±0.06），P＜0.05]，同時(shí)I/R組HO-1蛋白的相對表達(dá)量明顯高于Sham組[（0.71±0.06）vs（0.52±0.05），P＜0.05];I/R組TLR4、NF-κB P65蛋白的相對表達(dá)量明顯高于EGCG組[（1.24±0.09）vs(0.98±0.07)，（1.56±0.06)vs(1.27±0.06),P＜0.05]，且EGCG組TLR4、NF-κB P65

8、蛋白相對表達(dá)量明顯高于Sham組[（0.98±0.07）vs(0.60±0.07),(1.27±0.06) vs(0.59±0.05),P＜0.05]。 Real time-PCR結(jié)果示，HO-1 mRNA的相對表達(dá)水平EGCG組（5.86±0.94）的較I/R組(3.32±0.823)明顯增高(P＜0.05)，I/R組較Sham組(1.00±0.00)顯著增高(P＜0.01);TLR4、TNF-α、IL-6及IL-1b mRNA的相對

9、表達(dá)水平I/R組[(5.86±0.78)、(4.43±1.39)、(5.06±1.43)、(6.53±1.62)]較EGCG組[（3.82±1.42）、(2.74±0.73)、（2.93±0.80）、（4.36±1.19）]明顯增高(P＜0.05)，EGCG組較Sham組(1.00±0.00)顯著增高(P＜0.01)。
　　結(jié)論:EGCG可通過抑制炎癥反應(yīng)，減少肝組織缺血再灌注損傷，其機(jī)制:一方面可能與EGCG下調(diào)TLR4/NF-