HSP22在心肌缺血再灌注損傷中的保護作用.pdf

1、目的：熱休克蛋白(Heat shock protein，HSP)是生物體在對各種物理、化學(xué)和微生物應(yīng)激時啟動的一組因熱休克基因表達而產(chǎn)生的特殊蛋白質(zhì)，它們能快速調(diào)整應(yīng)激過程中細胞的存活機能，保護細胞抵御損傷并有助于細胞恢復(fù)正常的結(jié)構(gòu)和機能。心肌缺血再灌注損傷(Myocardial Ischemia/Reperfusion Injury，MIRI)是指缺血期處于可逆損傷的心肌細胞恢復(fù)血液供應(yīng)后產(chǎn)生更為嚴(yán)重的損傷，其保護作用的機制均與誘導(dǎo)產(chǎn)

2、生熱休克蛋白有關(guān)。本課題擬用已經(jīng)構(gòu)建的HSP22過表達的小鼠模型，應(yīng)用該模型研究HSP22在心肌缺血再灌注損傷中的作用，闡明HSP22對心肌缺血再灌注損傷的保護作用機制，為研制減少心肌梗塞、預(yù)防心肌疾病的藥物打下基礎(chǔ)。
　　 方法：對經(jīng)PCR、測序和Southern Blot分析證實的轉(zhuǎn)基因首建鼠，穩(wěn)定傳代后，取F4代小鼠的鼠尾提取DNA，經(jīng)PCR，測序鑒定出HSP22轉(zhuǎn)基因小鼠。采用體重和年齡均無顯著性差異的F4代野生型C57

3、BL小鼠(對照組，n=5)和pCAGGS-HA-HSP22轉(zhuǎn)基因C57BL小鼠(實驗組，n=5)制作心肌缺血再灌注損傷的模型，取其心臟標(biāo)本，通過免疫組化測定兩組小鼠心肌HSP22蛋白的含量，應(yīng)用直接化學(xué)法檢測缺血再灌注后心肌組織中丙二醛(MDA)和的蛋白質(zhì)羰基濃度。對所得結(jié)果進行統(tǒng)計學(xué)分析，比較兩組心肌組織HSP22蛋白的含量，丙二醛的濃度，蛋白質(zhì)羰基化程度的差異是否有統(tǒng)計學(xué)意義，分析HSP22蛋白對缺血再灌注后脂質(zhì)氧化損傷及蛋白質(zhì)氧化

4、損傷是否有保護作用。
　　 結(jié)果：⑴對攜帶人類野生型HSP22基因的轉(zhuǎn)基因小鼠傳代后的F3，F(xiàn)4代小鼠進行鼠尾DNA測序，成功鑒定出HSP22過表達的轉(zhuǎn)基因小鼠。⑵對照組和實驗組經(jīng)心肌缺血再灌注損傷的模型后的心肌組織中均有HSP22的蛋白表達，兩組蛋白主要在胞漿表達。實驗組小鼠的PI值為10.21±4.75，較對照組小鼠的PI值4.19±1.12明顯升高，P<0.05，差異顯著。⑶兩組小鼠MDA測定結(jié)果：對照組MDA含量為193

5、.89±27.61明顯高于實驗組82.96±29.14，P<0.05，差異顯著。⑷兩組小鼠蛋白質(zhì)羰基測定結(jié)果：對照組蛋白質(zhì)羰基含量為21.56±9.12明顯高于實驗組6.56±1.99，P<0.05，差異顯著。
　　 結(jié)論：①攜帶人類野生型HSP22基因的轉(zhuǎn)基因小鼠能在F3，F(xiàn)4代中穩(wěn)定傳代。②經(jīng)心肌缺血再灌注損傷模型后的小鼠心肌組織中HSP22的表達量實驗組明顯高于對照組。③HSP22在心肌缺血再灌注損傷中通過降低心肌脂質(zhì)過氧