自體骨髓干細胞移植對大鼠缺血后肢側(cè)支循環(huán)影響的研究.pdf

1、目的:將非純化的骨髓細胞懸液和純化的骨髓干細胞懸液分別移植于清潔級近交雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠缺血的后肢，觀察移植后SD大鼠體內(nèi)血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)的表達變化以及對缺血后肢血管新生的影響，探討骨髓干細胞移植治療下肢缺血性疾病的價值以及兩種移植方法的優(yōu)劣，為臨床治療下肢缺血性疾病提供理論基礎(chǔ)。
　　方法: SD大鼠30只，隨機分為3組：實驗1組（n=10）：非純化的骨髓細胞懸液移植組。實驗2組（n=10）

2、：純化的骨髓干細胞移植組；對照組（n=10）：同法僅注射等量的PBS；先后穿刺SD大鼠雙側(cè)股骨和脛骨的骨髓腔各一次，四次抽取骨髓液1ml，第1組制成濾過的骨髓液0.8ml。第2組抽取骨髓液0.8ml，加入PBS液，獲骨髓細胞懸浮液，用密度梯度離心法獲得純化的骨髓干細胞，用PBS重懸制成干細胞懸液0.8ml；實驗性SD大鼠后肢動脈缺血模型，采用楊盛家報道方法來構(gòu)建，模型成功建立后，立刻行骨髓細胞移植，術(shù)后4周，分別通過RT-PCR法和EL

3、ISA法來測定缺血區(qū)股部肌肉勻漿VEGF mRNA的表達情況和血清血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）處在哪個水平，激光多普勒血流儀測定皮膚微循環(huán)灌注量并進行肢體功能評分；
　　結(jié)果:（1）激光多普勒血流測定儀檢測下肢血流改善情況：移植后4周，雙側(cè)后肢的皮膚灌注量之差，實驗1組為14.1±6.6，實驗2組為19.9±7.2，對照組為31.4±9.6，兩個實驗組較對照組明顯減少，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（p<0.05）；實驗1組的雙側(cè)后肢皮膚灌注

4、量之差較實驗2組皮膚灌注量之差減少，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（p<0.05）。
　?。?）評估肢體的功能和對照相比較，兩組實驗組在術(shù)后2周右后肢肢體功能評分都沒有明顯的差異(P>0.05)，不過對于術(shù)后3周和4周的情形其差異就比較明顯(P<0.05)，治療組顯示出較好的肢體功能活動，且術(shù)后4周，治療1組功能評分高于治療2組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，
　?。?）各組大鼠血清中VEGF含量和肌肉勻漿中VEGF mRNA檢測結(jié)果

5、的比較術(shù)后4周，兩個實驗組動物血清中VEGF含量較對照組明顯升高，并且實驗1組動物血清中VEGF含量高于實驗2組動物，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（p<0.05）；兩個實驗組后肢肌肉勻漿VEGF mRNA的表達較對照組明顯增高（P<0.05），實驗1組肌肉VEGF mRNA的表達高于實驗2組（P<0.05）.
　　結(jié)論:
　　1.非純化的骨髓細胞和純化的骨髓干細胞分別移植治療大鼠后肢缺血是有效的。VEGF表達水平與缺血后肢側(cè)支循環(huán)的建