犬自體骨髓干細(xì)胞移植修復(fù)受損心肌的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、該研究就是通過為急性心梗模型犬移植自體骨髓間質(zhì)干細(xì)胞以觀察這種治療方法的療效.整個(gè)研究分以下四個(gè)部分.第一部分:犬自體骨髓干細(xì)胞的體外分離、增殖、分化和鑒定目的:驗(yàn)證骨髓間質(zhì)干細(xì)胞在體外能否分化為包括心肌細(xì)胞在內(nèi)的其他多種細(xì)胞.實(shí)驗(yàn)方法:抽取犬骨髓液10mL,應(yīng)用DMEM以1:1稀釋骨髓液,用1.063g/ml percoll密度分離液,以600g離心力,30分鐘分離骨髓單核細(xì)胞;以LG-DMEM及10﹪FBS添加100 U/ml pe

2、nicillin,100 μg/ml streptomycin,and 25μg/ml amphotericin B培養(yǎng)骨髓干細(xì)胞;利用細(xì)胞貼壁篩選法分離培養(yǎng)、擴(kuò)增骨髓間葉干細(xì)胞;應(yīng)用干細(xì)胞表面標(biāo)志蛋白檢測(cè),誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)分化間葉組織細(xì)胞等方法進(jìn)行犬骨髓間葉干細(xì)胞的鑒定.結(jié)論:密度梯度分離法與貼壁篩選法能夠較好進(jìn)行犬骨髓間葉干細(xì)胞的體外分離、培養(yǎng)與擴(kuò)增,分離培養(yǎng)的細(xì)胞具備骨髓間葉干細(xì)胞的特性,并可以定向分化為心肌細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、成骨細(xì)胞等多

3、種間葉組織類型細(xì)胞.第二部分:犬急性心肌梗死模型的制備和評(píng)價(jià)以及經(jīng)冠狀動(dòng)脈移植骨髓干細(xì)胞目的:制備急性心肌梗死模型犬,并進(jìn)行臨床評(píng)價(jià).同時(shí)經(jīng)冠狀動(dòng)脈(冠脈)進(jìn)行骨髓干細(xì)胞移植.第三部分:在體移植療效臨床評(píng)價(jià)目的:評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在飼養(yǎng)8~10周后的存活率、心功能及心肌代謝顯像.方法:模型動(dòng)物在接受移植后飼養(yǎng)8~10周,再次麻醉,對(duì)其進(jìn)行第二次臨床檢測(cè),包括:超聲心動(dòng)圖(UCG)、Tc99m靜息心肌灌注顯像(Tc99m-MIBI)和18FDG

4、-心肌代謝顯像(18FDG-PET).結(jié)論:自體骨髓干細(xì)胞移植確可顯著降低急性心梗犬的死亡率,改善心功能,提高左室射血分?jǐn)?shù),改善梗死區(qū)的血流灌注,這些效應(yīng)可能得益于移植的干細(xì)胞在宿主梗死區(qū)內(nèi)得到了增殖和分化.第四部分:組織病理學(xué)研究目的:通過免疫組化研究,找到移植細(xì)胞在宿主體內(nèi)得到增殖、分化的細(xì)胞學(xué)證據(jù),并對(duì)移植療效的機(jī)制提供細(xì)胞水平的解釋.結(jié)論:骨髓干細(xì)胞在梗死區(qū)部分分化為內(nèi)皮細(xì)胞,形成大量的新生毛細(xì)血管,參與梗死區(qū)供血的改善.部分分