自體骨髓干細胞延長小型豬肝移植術(shù)后存活的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:通過非靜脈轉(zhuǎn)流方式建立穩(wěn)定成熟的小型豬原位肝移植急性排斥反應(yīng)模型。 方法:小型豬包括兩種小型豬:版納小型豬(由四川醫(yī)學(xué)科學(xué)院實驗動物研究所提供);西藏小型豬(由南方醫(yī)科大學(xué)動物研究所提供)。實驗分為A、B兩組,A組:供體、受體均為中國版納小型豬,B組:版納豬作為供體,西藏小型豬作為受體,每一組中的供體和受體隨機匹配,在充分熟悉豬肝臟的解剖特點的基礎(chǔ)上,進行原位肝移植。在整個實驗中供體采用基礎(chǔ)麻醉,通過肝動脈及門靜脈雙灌注

2、方法進行供肝灌注,受體采用氣管插管+靜脈復(fù)合全麻醉。手術(shù)前術(shù)后測定肝功能(AST,Tbil)、術(shù)后觀察肝移植后豬的一般狀況,存活時間和肝臟組織的病理變化。 結(jié)果: 1、共進行小型豬原位肝移植手術(shù)32例,平均手術(shù)時間(139.61±14.27)min,平均無肝期(20.28±3.43)min,術(shù)中平均失血量359.22±66.91ml,平均輸血量410.06±51.13ml,無術(shù)中死亡,1例因腹腔出血術(shù)后1天死亡,因膽總管吻合口

3、膽瘺術(shù)后第5天死亡1例,1例術(shù)后3天因肺內(nèi)感染死亡,另1例術(shù)后第7天也因肺內(nèi)感染死亡。受體死亡后進行解劑未見門靜脈及肝動脈狹窄的情況。2、各組受體術(shù)后7d成活率分別為A組90.9%,B組70%,14天存活率A組為86.4%,B組受體均在1周左右死亡,14天存活率為0,A組生存時間明顯比B組延長(P<0.001);3、α=0.05為檢驗水準(zhǔn),在術(shù)前兩組血清AST、Tbil值的比較尚無統(tǒng)計學(xué)差異p>0.05,A組和B組中術(shù)后的AST總體變化

4、比較有顯著的統(tǒng)計學(xué)差異(p<0.001,F(xiàn)=15.11);A組和B組中術(shù)后的Tbil總體變化比較有顯著的統(tǒng)計學(xué)差異(p<0.001,F(xiàn)=24.99);術(shù)后AST、Tbil在兩組中都有升高,A組中AST升高的緩慢術(shù)后1天和術(shù)后3天比較沒有統(tǒng)計學(xué)意義(p=0.091),與術(shù)后6天比較有統(tǒng)計學(xué)意義(p=0.004),術(shù)后3天和術(shù)后6天的比較沒有統(tǒng)計學(xué)意義(p=0.82),Tbil升高的緩慢術(shù)后1天分別與術(shù)后3天、6天比較有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.

5、05),術(shù)后3天和術(shù)后6天比較沒有統(tǒng)計學(xué)差異(p>0.05);B組中術(shù)后AST逐漸升高,不同時間點的變化有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.001,F(xiàn)=73.35),術(shù)后1天和術(shù)后3天的比較無統(tǒng)計學(xué)意義(p>0.05),與術(shù)后6天的比較有統(tǒng)計學(xué)差異(p<0.001),術(shù)后3天的和術(shù)后6天的比較有統(tǒng)計學(xué)差異(p=0.01)。Tbil也是逐漸性升高不同時間點的比較有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.001,F(xiàn)=25.58),術(shù)后1天的分別與術(shù)后3天、6天的

6、比較有統(tǒng)計學(xué)差異(p<0.05),術(shù)后3天與術(shù)后6天比較有統(tǒng)計學(xué)意義(p=0.025)。4、病理變化:術(shù)后A組移植肝臟中出現(xiàn)了缺血再灌注損傷的病理表現(xiàn),術(shù)后B組移植肝臟中出現(xiàn)嚴重急性排斥反應(yīng),肝組織匯管區(qū)大量炎癥細胞聚集,部分肝小葉出現(xiàn)壞死。 結(jié)論:1、成功地建立了成熟穩(wěn)定的非靜脈轉(zhuǎn)流方式的中國小型豬原位肝移植急性排斥反應(yīng)的模型;2、A組的受體在肝移植后的生存時間明顯長于B組中的受體,B組受體移植的肝臟中出現(xiàn)了嚴重的急性排斥反

7、應(yīng),本研究成功的建立了不同封閉群小型豬之間的異體原位肝移植的急性排斥反應(yīng)模型;3、非靜脈轉(zhuǎn)流方式在小型豬原位肝移植中是可行的。 目的:在已建立的小型豬原位肝移植急性排斥反應(yīng)模型的基礎(chǔ)上,研究在術(shù)中經(jīng)門靜脈輸注經(jīng)BrdU標(biāo)記的自體骨髓干細胞在移植肝中的分化狀況和對受體長期存活影響。 方法:非靜脈轉(zhuǎn)流的方式建立小型豬的原位肝移植急性排斥反應(yīng)的模型,供體豬為版納小型豬(由四川醫(yī)學(xué)科學(xué)院實驗動物研究所提供),受體

8、豬均為西藏小型豬(由南方醫(yī)科大學(xué)動物研究所提供),實驗分為兩組,對照組(在第一部分實驗中,從B組的10例受體中隨機抽取8例作為第二部分的對照組)和處理組,提前抽取處理組受體豬的骨髓血,分離培養(yǎng)獲得骨髓干細胞并經(jīng)BrdU標(biāo)記,對照組僅行原位肝移植,處理組在原位肝移植的基礎(chǔ)上,在術(shù)中經(jīng)門靜脈輸注標(biāo)記好的受體自身骨髓肝細胞,術(shù)后14天、28天,取病理組織活檢觀測移植細胞的分化狀況和功能,同時在受體麻醉后開腹術(shù)前,術(shù)后1天、3天、6天采靜脈血檢

9、測肝功能的變化(AST、ALT),并觀測豬的一般狀況和生存時間及病理變化。 結(jié)果:1、處理組中BrdU標(biāo)記細胞的陽性率在移植后14天、28天分別為31.70±1.79%,33.85±1.99%,兩者之間比較沒有統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05);2、BrdU標(biāo)記細胞和白蛋白染色雙陽性率在術(shù)后14天、28天分別為28.53±1.28%,30.42±1.59%,兩者之間無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。這說明BrdU標(biāo)記的受體自身骨髓干細胞在

10、移植的肝臟微環(huán)境中發(fā)育分化為肝細胞,并具有生物學(xué)活性,能夠分泌白蛋白;3、生存狀況:兩組中位生存時間(Median survival time,MST)分別為:對照組7d,處理組32d,處理組明顯比對照組的生存時間延長P<0.001。對照組中的受體一般都在1周左右死亡,而處理組中的受體大多數(shù)能夠存活1個月左右;4、肝功能變化:α=0.05為檢驗水準(zhǔn),(1)術(shù)前兩組血清AST、ALT值的比較尚無統(tǒng)計學(xué)差異(p>0.05),處理組和對照組中

11、AST總體變化比較有顯著的統(tǒng)計學(xué)差異(p=0.002,F(xiàn)=7.626);處理組和對照組中ALT總體變化比較有顯著的統(tǒng)計學(xué)差異(p=0.002,F(xiàn)=8.877);(2)術(shù)后AST、ALT在兩組中都有升高,處理組中ASl、在不同時間點的變化有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.001,F(xiàn)=123.15),術(shù)前AST變化分別與術(shù)后不同時間點的變化比較有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05);處理組中ALT升高的緩慢術(shù)后1天分別與術(shù)后3天、6天比較有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.0

12、5),術(shù)后3天和術(shù)后6天比較沒有統(tǒng)計學(xué)差異(p>0.05);(3)對照組中AST術(shù)后逐漸升高,不同時間點比較有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.001,F(xiàn)=46.64).術(shù)后1天與術(shù)后6天的比較有統(tǒng)計學(xué)差異(p=0.001),術(shù)后3天和術(shù)后6天比較有統(tǒng)計學(xué)差異(p=0.017).ALT也是逐漸性升高不同時間點的比較有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.001,F(xiàn)=41.80),術(shù)后1天的分別與術(shù)后3天、6天的比較有統(tǒng)計學(xué)差異(p<0.05);5、組織病理變

13、化:術(shù)后兩組均出現(xiàn)不同程度的免疫排斥反應(yīng),對照組在術(shù)后3天移植的肝臟中出現(xiàn)匯管區(qū)大量炎癥細胞聚集,主要是淋巴細胞,炎癥反應(yīng)重,肝細胞渾濁,氣球樣變性并出現(xiàn)不同程度的點狀、灶狀壞死,而處理組在術(shù)后3天病理活檢見:大致呈正常肝臟病理,肝組織輕度淤血,血管周圍少量炎性細胞浸潤,少數(shù)匯管區(qū)小靜脈或肝靜脈內(nèi)皮細胞下淋巴細胞浸潤,肝細胞點狀壞死,中性粒細胞浸潤。 結(jié)論:1、自體骨髓干細胞延長了受體的存活時間;2、能夠在移植肝臟中分化為肝細

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