鹽酸戊乙奎醚對新生大鼠腦缺血再灌注損傷保護機制的探討.pdf

1、新生兒期腦缺血再灌注損傷是引起小兒腦癱、癲癇發(fā)作、智力障礙和共濟失調(diào)等疾病的重要原因。及時恢復缺血組織的供血是治療該病的關(guān)鍵，但是在恢復供血的同時，研究者發(fā)現(xiàn)再灌注組織的損傷反而加重，這種現(xiàn)象稱為缺血再灌注損傷。缺血再灌注損傷的發(fā)病機制是多因素相互作用的結(jié)果，其中細胞凋亡在缺血再灌注損傷中占有重要地位。因此，有效的抑制細胞凋亡，恢復細胞功能，是治療該病的關(guān)鍵。
　　 細胞色素C(Cyt-c)是位于線粒體內(nèi)膜外表面的一種水溶性蛋白

2、，它不僅是線粒體電子傳遞鏈復合體的組成成分，同時在氧化呼吸鏈中起到傳遞電子的作用。研究表明，Cyt-c的大量釋放可導致細胞核出現(xiàn)凋亡的特征性改變。Cyt-c從線粒體內(nèi)釋放是細胞凋亡機制研究的關(guān)鍵。半胱天冬蛋白酶家族即Caspases是哺乳動物細胞凋亡的關(guān)鍵，其中半胱氨酸的天冬蛋白酶-3(Caspase-3)被認為是Caspase途徑中最關(guān)鍵的效應(yīng)蛋白。細胞凋亡的線粒體途徑通過Caspase-3激活下游底物，使細胞呈現(xiàn)凋亡的特征表現(xiàn)。

3、r>　　 研究表明，M膽堿能受體阻滯劑對腦缺血再灌注損傷有保護作用，機制包括Ca2+超載、自由基生成、興奮性氨基酸釋放、細胞能量代謝障礙、乙酰膽堿增加等學說。鹽酸戊乙奎醚不僅抑制氧自由基生成、穩(wěn)定溶酶體和細胞膜，而且具有抑制炎癥因子的釋放、改善微循環(huán)的作用，但其具體機制仍需進一步研究。
　　 目的：
　　 本研究擬采用新生大鼠腦缺血再灌注模型，通過術(shù)前給予鹽酸戊乙奎醚干預，光鏡下觀察腦組織的病理改變，同時運用免疫組化法

4、檢測大腦皮質(zhì)區(qū)Cyt-c和Caspase-3蛋白的變化，探討鹽酸戊乙奎醚對新生大鼠腦缺血再灌注損傷的保護作用。
　　 方法：
　　 健康7日齡新生SD大鼠32只，雌雄不拘，隨機分成4組(n=8)：假手術(shù)組(NS組，術(shù)前30min腹腔注射生理鹽水，分離雙側(cè)頸總動脈，不夾閉頸總動脈不進行再灌注)、對照組(IR組，術(shù)前30min腹腔注射生理鹽水，夾閉雙側(cè)頸總動脈15min后再灌注24h)、鹽酸戊乙奎醚低劑量組（PL組，術(shù)前30

5、min腹腔注射PHC0.1mg·kg，夾閉雙側(cè)頸總動脈15min后再灌注24h）、鹽酸戊乙奎醚高劑量組(PH組，術(shù)前30min腹腔注射PHC1mg·kg，夾閉雙側(cè)頸總動脈15min后再灌注24h)。再灌注24h后，處死大鼠，快速取腦，4％甲醛溶液固定腦組織。行HE染色，觀察腦組織病理形態(tài)的改變，免疫組化法測定再灌注24h大腦皮質(zhì)區(qū)Cyt-c蛋白和Caspase-3蛋白的表達。
　　 結(jié)果：
　　 1、光鏡觀察：NS組腦組

6、織中神經(jīng)細胞的結(jié)構(gòu)和排列正常；IR組神經(jīng)細胞排列紊亂，細胞核固縮，可見大量的鬼影細胞，細胞之間排列疏松，可見大量無細胞區(qū)；PL組神經(jīng)細胞排列較規(guī)整，細胞核固縮少，可見少量鬼影細胞，細胞之間排列較IR組緊密；PH組神經(jīng)元之間排列緊密，細胞核正常，可見少量神經(jīng)元核固縮，但程度和范圍比PL組輕，較N/S組重。
　　 2、腦組織Cyt-c蛋白的表達：與NS組比較，IR組、PL組和PH組腦組織Cyt-c蛋白均升高(P＜0.05)；與I組比

7、較，PL組和PH組腦組織Cyt-c蛋白的表達均降低(P＜0.05)；與PL組比較，PH組腦組織Cyt-c蛋白的表達降低(P＜0.05)。
　　 3、腦組織Caspase-3蛋白的表達：與NS組比較，IR組、PL組和PH組腦組織Caspase-3蛋白均升高(P＜0，05)；與IR組比較，PL組和PH組腦組織Caspase-3蛋白的表達均降低(P＜0.05)；與PL組比較，PH組腦組織Caspase-3蛋白的表達降低（P＜0.05）