定向中波高能紫外線治療白癜風的臨床和實驗研究.pdf

1、本文對定向中波高能紫外線治療白癜風進行了臨床和實驗研究。本研究分為三個部分：
　　 第一部分：定向中波高能紫外線與窄譜中波紫外線治療白癜風的臨床研究。
　　 目的：評價定向中波高能紫外線(以下簡稱TH-UVB)與窄譜中波紫外線(NB-UVB)治療白癜風的療效與安全性。
　　 方法：采用自身對照的方法，對33名白癜風患者進行觀察。取白癜風患者自身對稱或相鄰的皮損為靶皮損，隨機選擇試驗側和對照側分別使用TH-UVB或

2、NB-UVB進行照射。試驗側治療前測定最小紅斑量(MED)，初次照射選用2倍MED，根據前次治療反應決定下一次劑量。如前次治療后未出現清晰紅斑，下，次劑量增加10％；出現持續(xù)清晰可見的紅斑后，每次維持原有劑量；如出現疼痛或水皰等，則暫停治療，癥狀消退后下次照射劑量減少10％。對照側初次劑量一般為70％的平均MED，根據前次治療反應決定下一次劑量。如前次治療后局部無紅斑或紅斑持續(xù)時間<24h，下次劑量增加10％；紅斑持續(xù)24～72h，維持

3、原照射劑量不變；如紅斑超過72h或出現水皰，則暫停治療，癥狀消退后下次照射劑量減少10％。每周治療2次，共治療12周。治療前及治療后每周拍照對比，記錄患者皮損處色素再生面積與治療前皮損面積的百分比，同時比較不同年齡、性別、發(fā)病年齡、病程、部位、臨床類型的療效。用SPSS統計軟件分析數據，并記錄不良反應。
　　 結果：3例患者未完成試驗，最終納入分析30例患者。其中男14例，女16例；年齡19～56歲，平均(34.3±8.9)歲。

4、皮損位于面頸部5例，軀干部14例，四肢8例，手足3例。治療12周后，試驗側有效率為56.7％，對照側為20.0％，經卡方檢驗，差異有統計學意義(P<0.05)。試驗側開始色素再生的照射次數平均為(7.95±3.43)次。對照側平均為(15.36±3.43)次，經配對樣本t檢驗，差異有統計學意義(P<0.05)。經Logistic回歸分析各臨床特征與臨床療效的相關性，顯示療效與患者發(fā)病部位、臨床類型、年齡、性別、發(fā)病年齡、病程等均無相關性

5、(P均>0.05)。試驗側不良反應發(fā)生率較對照側高(P<0.05)，但均輕微且不影響治療。
　　 結論：TH-UVB與NB-UVB相比治療白癜風療效更好、起效更快，且安全性均較好。
　　 第二部分：不同中波紫外線對豚鼠皮膚色素沉著及α-黑素細胞剌激素、內皮素-1表達的影響。
　　 目的：探討不同劑量TH-UVB與NB-UVB照射對豚鼠皮膚色素沉著及表達α-黑素細胞刺激素(α-MSH)、內皮素-1(ET-1)的影響

6、。
　　 方法：以正常棕黃色豚鼠為實驗模型，在其背部取五塊相離的區(qū)域分為TH-UVB高、低劑量組、NB-UVB高、低劑量組及空白對照組進行照射。TH-UVB高、低劑量組起始劑量分別為270、90mJ/cm2，照射后發(fā)生持續(xù)24h以上紅斑即每次維持原有劑量，如果初次治療后未發(fā)生紅斑，則下次劑量增加10％，發(fā)生紅斑但24h內消退者下次增加5％，如出現水皰、脫屑等，暫停治療至癥狀緩解，下次照射劑量減少10％。NB-UVB高、低劑量組起

7、始劑量分別為200、100 mJ/cm2，每次劑量增加20％，出現輕微紅斑則增加10％，出現清晰紅斑暫停一次治療，出現水皰、疼痛等，則暫停治療，癥狀消退后下次照射劑量減少10％。每周照射2次，共照射8周。空白對照組不予處理。每2周對實驗區(qū)域進行拍攝，并按時記錄豚鼠皮膚色素沉著情況。全部實驗結束后處死動物。分別取空白對照組與各實驗組照射區(qū)域皮膚組織，采用肉眼評估及黑素顆粒染色(Fontana-Masson法)研究其致色素沉著作用；通過免疫

8、組化法和逆轉錄.聚合酶鏈式反應(RT-PCR法)檢測豚鼠皮膚中的α-MSH、ET-1蛋白及mRNA表達情況。
　　 結果：部分豚鼠皮膚照射后出現脫屑等不良反應，減少劑量或暫停照射即可緩解。各照射組均在照射1周后出現色素沉著，TM-UVB組較為均勻、清晰，NB-UVB組僅見散在色沉斑片?？瞻讓φ战M未見明顯變化。隨著照射時間和累積劑量的增加，各組色素逐漸加深，分布逐漸均勻。各組的色素沉著評分、黑素顆粒含量差異均有統計學意義(P均<0

9、.05)，TH-UVB高、低劑量組之間差異無統計學意義(P>0.05)，但均高于NB-UVB組(P<0.05)，且NB-UVB高劑量組高于低劑量組(P<0.05)；各組的α-MSH免疫組化計分差異有統計學意義(P<0.05)，TH-UVB組高于NB-UVB組(P<0.05)，但每種光源不同劑量組之間差異無統計學意義(P>0.05)；各組的α-MSH mRNA表達水平差異有統計學意義(P<0.05)，TH-UVB高、低劑量組之間以及NB-

10、UVB低劑量組與空白對照組之間差異無統計學意義(P>0.05)，余兩兩比較差異均有統計學意義(P均<0.05)；各組的ET-1免疫組化結果差異有統計學意義(P<0.05)，NB-UVB高、低劑量組之間差異無統計學意義(P>0.05)，其余各組兩兩比較，差異均有統計學意義(P均<0.05)；各組的ET-1mRNA表達水平差異有統計學意義(P<0.05)，NB-UVB高、低劑量組之間差異無統計學意義(P>0.05)，其余各組兩兩比較，差異均

11、有統計學意義(P均<0.05)。
　　 結論：TH-UVB在致豚鼠皮膚色素沉著作用上優(yōu)于NB-UVB；該兩種光源均可促進豚鼠表皮中α-MSH和ET-1蛋白及mRNA水平的表達，且TH-UVB作用更為顯著。
　　 第三部分：不同中波紫外線對人角質形成細胞α-MSH、ET-1表達和分泌的影響。
　　 目的：⑴探討不同劑量TH-UVB照射對人角質形成細胞株(HaCaT細胞)α-MSH、ET-1蛋白水平及mRNA水平的影

12、響，并與NB-UVB進行比較，探討兩種光源的差別：⑵探討300mJ/cm2TH-UVB照射后不同時間點HaCaT細胞α-MSH、ET-1蛋白水平與mRNA水平的變化。
　　 方法：常規(guī)培養(yǎng)HaCaT細胞，6孔培養(yǎng)板中每孔接種106個細胞。當細胞生長至80％融合時進行照射，細胞與光源間的照射距離為15cm。實驗設立兩組：劑量組分別用0、100、200、300、400、500 mJ/cm2的TH-UVB和NB-UVB照射HaCaT細

13、胞，24h后收集上清液及細胞。ELISA方法測定培養(yǎng)上清液中α-MSH、ET-1分泌量，RT-PCR法測定細胞α-MSH、ET-1mRNA的表達量。時間組用300 mJ/cm2TH-UVB照射HaCaT細胞，分別在0、6、12、24、48、72h后用ELISA方法測定上清液中α-MSH、ET-1分泌量，RT-PCR法測定細胞α-MSH、ET-1mRNA的表達量。每組實驗重復3次。
　　 結果：不同劑量的TH-UVB和NB-UVB

14、都可以促進HaCaT細胞α-MSH的表達、分泌。TH-UVB在劑量為300～400mJ/cm2時，上清液中α-MSH濃度最高，明顯高于100～200m.1/cm2組(P均<0.05)；細胞α-MSH mRNA表達量亦最大，在0～300mJ/cm2范圍內隨照射劑量增加而增加。400mJ/cm2時，培養(yǎng)細胞出現明顯皺縮、圓化，懸浮，α-MSH表達、分泌水平下降，劑量增至500mJ/cm2時更為顯著。NB-UVB在劑量為500mJ/cm2時α

15、-MSH濃度最高，細胞α-MSH mRNA表達量亦最大，200～300mJ/cm2范圍內無差別(P均>0.05)。兩種光源同一劑量對比，TH-UVB100～400mJ/cm2照射后HaCaT細胞的α-MSH分泌量均高于同劑量NB-UVB組(P均<0.05)，500mJ/cm2組沒有差別(P>0.05)；200～400mJ/cm2照射后細胞α-MSH mRNA表達量均高于同劑量NB-UVB組(P均<0.05)，而100、500mJ/cm2

16、照射后沒有差別(P均>0.05)。TH-UVB在200～500mJ/cm2劑量照射后，上清液中ET-1濃度均高于未照射組(P均<0.05)，但該照射梯度內ET-1分泌量無差異(P均>0.05)。分子水平上200mJ/cm2劑量時ET-1 mRNA表達開始增高，300mJ/cm2時達到高峰，400mJ/cm2時開始下降，500mJ/cm2時與未照射組無差異(P>0.05)。NB-UVB100～500mJ/cm2照射后上清液中ET-1濃度均

17、高于未照射組(P均<0.05)，在該照射梯度內ET-1分泌量無差異(P均>0.05)。但分子水平上200～500mJ/cm2時ET-1 mRNA表達量高于未照射組且在該照射梯度內呈劑量依賴(P均<0.05)，照射劑量達500mJ/cm2時ET-1 mRNA表達量最高。兩種光源同一劑量比較，TH-UVB500mJ/cm2照射后上清液中的ET-1濃度高于同劑量NB-UVB組(P<0.05)，100～400mJ/cm2照射后沒有差別(P均>0

18、.05)；200～500mJ/cm2照射后細胞ET-1mRNA表達量均高于同劑量NB-UVB組(P均<0.05)，100mJ/cm2照射后沒有差別(P>0.05)。300 mJ/cm2TH-UVB照射后6h HaCaT細胞上清液中α-MSH濃度開始增高，24h達到高峰并維持在這一水平至72h；細胞α-MSH mRNA表達量也于6h開始增高，24h達到高峰，持續(xù)至48h，72h開始下降。300 mJ/cm2 TH-UVB照射后6h上清液E