CO2氣腹充氣模式及壓力對大鼠子宮內(nèi)膜異位癥形成和復發(fā)的影響及機制研究.pdf

1、研究背景：
　　 子宮內(nèi)膜異位癥(Endometriosis，EMs)是指具有生長功能的子宮內(nèi)膜間質(zhì)和腺體出現(xiàn)子宮體腔以外的部位。EMs是婦科常見疾病，在育齡女性中發(fā)病率約10％，在不育和慢性盆腔痛患者中發(fā)病率為35-50％。腹腔鏡手術(shù)是診斷和治療EMs的主要手段。但EMs術(shù)后易復發(fā)，據(jù)統(tǒng)計術(shù)后5年年均復發(fā)率約10％，其中大約50％的復發(fā)患者需要再次手術(shù)治療。CO2是目前最常用的腹腔鏡膨腹介質(zhì)，研究發(fā)現(xiàn)CO2氣腹可促進結(jié)腸癌和肝

2、癌腫瘤細胞術(shù)后種植與轉(zhuǎn)移。異位內(nèi)膜組織具有侵襲、粘附、血管形成和抗細胞凋亡等類腫瘤生物學行為。那么腹腔鏡手術(shù)時CO2氣腹會促進內(nèi)膜異位病灶形成和復發(fā)嗎？研究發(fā)現(xiàn)，腹腔鏡手術(shù)治療子宮內(nèi)膜異位囊腫患者術(shù)后復發(fā)率低于開腹手術(shù)者。前期我們通過構(gòu)建大鼠EMs模型，發(fā)現(xiàn)CO2氣腹對大鼠內(nèi)膜異位病灶的粘附、侵襲和血管生成有抑制用。Hu L等分別用CO2和N2作為膨腹介質(zhì)干預EMs大鼠，發(fā)現(xiàn)CO2氣腹能縮小異位病灶體積，這和我們前期實驗結(jié)果一致。目前C

3、O2氣腹機多為電子脈沖式充氣模式，該充氣模式下腹腔內(nèi)瞬間的壓力可高出設定值2.2倍。另外研究發(fā)現(xiàn)在模擬人類氣腹程序中，大鼠氣腹模型最優(yōu)充氣壓力是5mmHg，當氣壓大于8mmHg時大鼠就無法用于模擬人類日常手術(shù)時的氣腹情況。而我們早期以及Hu L的研究均是在電子脈沖式氣腹機非恒定壓力作用下得到的結(jié)果，并且作用于大鼠的氣腹壓力均超過10mmHg。因此本課題擬利用充氣壓力相對恒定的恒壓變流式和電子脈沖式兩種CO2氣腹機作用EMs大鼠，設定氣腹

4、壓力5mmHg和10mmHg，通過橫向?qū)Ρ龋M一步觀察不同CO2氣腹充氣模式及壓力對EMs大鼠成模和異位病灶復發(fā)有何影響，并對其發(fā)生、發(fā)展機制作初步探討。
　　 第一部分不同二氧化碳氣腹充氣模式和壓力對大鼠子宮內(nèi)膜異位癥模型成模的影響
　　 目的:評價不同CO2氣腹充氣模式和壓力對大鼠子宮內(nèi)膜異位癥成模率、異位灶大小、組織病理學及組織相關分子生物學指標的影響。
　　 方法
　　 1、通過自體內(nèi)膜移植法構(gòu)建

5、大鼠EMs模型，建模后第7天給予恒壓和脈沖式兩種CO2氣腹充氣模式干預1小時。分組:對照組（A組）、5mmHg脈沖氣腹組（B組）、10mmHg脈沖氣腹組（C組）、5mmHg恒壓氣腹組（D組）、10mmHg恒壓氣腹組（E組）。
　　 2、建模28天后觀察大鼠EMs成模率，病灶大小。
　　 3、HE染色觀察病灶組織病理學改變，免疫組化測定病灶組織ICAM-1、MMP-9和VEGF-C的表達。
　　 結(jié)果：
　　

6、 1、各氣腹組EMs成模率和對照組相比無統(tǒng)計學差異，但異位病灶體積均顯著低于對照組，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。其中C組（10mmHg脈沖氣腹組）病灶體積大于B、D、E氣腹組，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　 2、各氣腹組病灶組織ICAM-1、MMP-9和VEGF-C的表達均低于對照組，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。其中C組（10mmHg脈沖氣腹組）VEGF-C表達顯著高于B、D、E氣腹組，差異具有統(tǒng)計

7、學意義(P＜0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 在大鼠EMs病灶形成中，CO2氣腹對病灶體積有抑制作用。CO2氣腹對異位病灶ICAM-1、MMP-9和VEGF-C的表達均有抑制作用。但10mmHg脈沖模式氣腹對病灶異位種植過程中血管生成的抑制作用較弱。
　　 第二部分不同二氧化碳氣腹充氣模式和壓力對EMs大鼠復發(fā)病灶粘附、侵襲、血管生成相關因子的影響
　　 目的:評估不同CO2氣腹充氣模式和壓力對EMs大鼠

8、病灶復發(fā)率和復發(fā)病灶粘附、侵襲、血管生成相關因子的影響。
　　 方法：
　　 1、選取建模成功的EMs大鼠，給予恒壓和脈沖式兩種CO2氣腹充氣模式干預1小時，術(shù)畢剝除異位病灶并重新縫合。分組:對照組（A組）、5mmHg脈沖氣腹組(B組)、10mmHg脈沖氣腹組（C組）、5mmHg恒壓氣腹組（D組）、10mmHg恒壓氣腹組（E組）。
　　 2、氣腹干預后4周，觀察EMs大鼠病灶復發(fā)率和病灶大小。
　　 3、

9、Real Time-PCR和Western-blot技術(shù)檢測復發(fā)病灶ICAM-1、MMP-9和VEGF-C mRNA和蛋白的表達。
　　 結(jié)果：
　　 1、B、D、E氣腹組異位病灶復發(fā)率顯著低于對照組和C組。四個氣腹組復發(fā)病灶體積顯著低于對照組，其中C組病灶體積又高于B、D、E氣腹組，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　 2、各氣腹組ICAM-1、MMP-9和VEGF-C mRNA和蛋白表達均顯著低于對照組

10、，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。其中C組VEGF mRNA和蛋白表達高于B、D、 E氣腹組，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 CO2氣腹可抑制復發(fā)病灶體積，并抑制病灶ICAM-1，MMP-9，VEGF-C mRNA和蛋白表達。穩(wěn)定的恒壓充氣模式及低壓力脈沖充氣模式氣腹可降低EMs大鼠子盆腔異位病灶復發(fā)率。
　　 第三部分不同二氧化碳氣腹充氣模式和壓力對大鼠子宮內(nèi)膜異位癥模型復發(fā)病灶細

11、胞凋亡的影響
　　 目的:評估不同CO2氣腹充氣模式和壓力對大鼠子宮內(nèi)膜異位癥復發(fā)病灶細胞凋亡的影響。
　　 方法：
　　 1、選取建模成功的EMs大鼠，給予恒壓和脈沖式兩種CO2氣腹充氣模式干預1小時，術(shù)畢剝除異位病灶并重新縫合。分組:對照組（A組）、5mmHg脈沖氣腹組(B組)、10mmHg脈沖氣腹組（C組）、5mmHg恒壓氣腹組（D組）、10mmHg恒壓氣腹組（E組）。
　　 2、氣腹干預后7天，用

12、Tunel法檢測異位病灶組織細胞凋亡情況。
　　 3、Real Time-PCR和Western-blot技術(shù)檢測復發(fā)異位病灶凋亡抑制因子survivinmRNA和蛋白的表達。
　　 4、透射電鏡觀察異位病灶細胞超微結(jié)構(gòu)。
　　 結(jié)果：
　　 1、B、D、E氣腹組異位病灶組織凋亡指數(shù)顯著高于對照組和C組，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　 2、各氣腹組survivin mRNA和蛋白的表達

13、均顯著低于對照組，其中C組survivinmRNA和蛋白表達高于B、D、E干預組，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　 3、透射電鏡觀察:對照組異位內(nèi)膜病灶細胞膜清晰完整，線粒體電子密度高，形態(tài)較好。各氣腹干預組異位內(nèi)膜病灶見不同程度細胞核皺縮，染色質(zhì)凝集，邊緣化，線粒體發(fā)生腫脹，脊紊亂，發(fā)生空泡化，肌絲走向紊亂，胞漿內(nèi)糖原顆粒減少。部分細胞核凋亡，胞漿內(nèi)出現(xiàn)大囊泡，線粒體空泡化顯著，甚至破裂解體。但是C組染色質(zhì)凝集及細胞

14、核凋亡情況較其他三個氣腹組輕。
　　 結(jié)論：
　　 CO2氣腹可促進大鼠盆腔異位內(nèi)膜細胞發(fā)生凋亡，并抑制survivin mRNA和蛋白表達。穩(wěn)定的恒壓充氣模式和低壓力脈沖充氣模式氣腹能更好的促進異位內(nèi)膜細胞凋亡。
　　 全文結(jié)論:
　　 1、5mmHg、10mmHg恒壓模式CO2氣腹和5mmHg脈沖模式CO2氣腹可抑制EMs大鼠成模和復發(fā)的異位病灶體積，并能降低大鼠EMs復發(fā)率。10mmHg脈沖模式CO