FN-整合素對哮喘大鼠氣道平滑肌細(xì)胞分泌功能的調(diào)控.pdf

1、目的:
　　 探討纖維粘連蛋白(fibronectin，F(xiàn)N)-整合素對哮喘氣道平滑肌細(xì)胞(airwaysmooth muscle cells，ASMCs)分泌功能的調(diào)控。
　　 方法:
　　 利用組織貼壁法和多酶混合消化法原代培養(yǎng)大鼠ASMCs，并用細(xì)胞形態(tài)學(xué)和免疫組化SABC 方法鑒定；將正常大鼠和哮喘大鼠ASMCs 均分別種植在涂覆有 FN的和空白（無FN 涂覆）的玻片上，通過SP 免疫組化方法檢測細(xì)胞爬片

2、中粘著斑蛋白的表達(dá)。整合素抗體干預(yù)如上處理的正常及哮喘ASMCs，不做干預(yù)的如上處理的正常及哮喘ASMCs 作為對照組，采用RT-PCR方法檢測RANTES （regulated onactivated normal T cell expressed and secreted）、轉(zhuǎn)化生長因子-β1(transcriptiongowth factor-β1，TGF-β1)mRNA的表達(dá)水平；ELISA 方法檢測各組培養(yǎng)上清中RANTES

3、蛋白水平。
　　 結(jié)果:
　　 原代培養(yǎng)的細(xì)胞呈典型的“谷峰狀”生長，胞質(zhì)內(nèi)特異性的平滑肌肌動蛋白呈陽性表達(dá)，符合平滑肌細(xì)胞的形態(tài)學(xué)特征和生物學(xué)特性。FN 作用的哮喘大鼠ASMCs 粘著斑蛋白的表達(dá)明顯增加，但未經(jīng)FN 作用的哮喘大鼠ASMCs 及經(jīng)（或未經(jīng)）FN 作用的正常大鼠ASMCs 粘著斑蛋白均呈陰性表達(dá)。在哮喘細(xì)胞中，F(xiàn)N 處理組較無FN 處理的空白組TGF-β1、RANTES mRNA的表達(dá)水平和細(xì)胞培養(yǎng)上清

4、中的RANTES 蛋白水平均顯著增加（P<0.05）；整合素抗體+空白組的RANTES、TGF-β1 mRNA表達(dá)水平和細(xì)胞培養(yǎng)上清中的RANTES 蛋白水平較空白組表達(dá)顯著減少（P<0.05）；整合素抗體+FN組的RANTES、TGF-β1 mRNA的表達(dá)和細(xì)胞培養(yǎng)上清中的RANTES 蛋白水平較FN 處理組表達(dá)顯著減少（P<0.05）。
　　 結(jié)論:
　　 FN 促進(jìn)哮喘大鼠ASMCs 粘著斑蛋白的表達(dá)；FN-整合素