LN-整合素α7信號通路對哮喘大鼠氣道平滑肌細(xì)胞分泌功能的影響.pdf

1、研究背景:
　　氣道慢性炎癥和氣道重塑是哮喘的兩大特征性改變。氣道壁中細(xì)胞外基質(zhì)的沉積增加(如:膠原、層黏連蛋白和纖維黏連蛋白等)是哮喘氣道重塑的重要病理學(xué)特征。氣道平滑肌細(xì)胞作為氣道收縮元件之一,它可以分泌多種炎癥因子、趨化因子和生長因子等包括:TGF-β1,RANTES和GM-CSF等。細(xì)胞外基質(zhì)主要通過整合素受體等與氣道平滑肌細(xì)胞發(fā)生相互作用。相關(guān)研究證實(shí)層黏連蛋白作為細(xì)胞外基質(zhì)的一種組分,可以通過整合素α7的介導(dǎo)誘導(dǎo)氣道平

2、滑肌細(xì)胞由增殖表型向收縮表型的成熟,然而對于層黏連蛋白-整合素α7信號通路是否也能夠影響氣道平滑肌細(xì)胞的分泌功能,目前尚未見報(bào)道。
　　目的:
　　探討層黏連蛋白是否可以影響哮喘大鼠氣道平滑肌細(xì)胞分泌TGF-β1,RANTES和GM-CSF等細(xì)胞因子的水平,這一功能是否是通過層黏連蛋白-α7信號通路來實(shí)現(xiàn)的。
　　方法:
　　本實(shí)驗(yàn)首先建立大鼠哮喘模型,培養(yǎng)出哮喘及非哮喘大鼠的ASMCs;將培養(yǎng)瓶中的ASMCs(

3、以5000個(gè)/cm2的濃度)分別種植在普通培養(yǎng)板上(plastic,PI,也就是下面所說的空白培養(yǎng)板)及預(yù)先包被有LN(10ug/ml)的培養(yǎng)板上,應(yīng)用整合素特異性的阻斷抗體(α7單克隆抗體)和可溶性的整合素競爭性多肽((H-Gly-Arg-Gly-Asp-Ser-Pro-OH(GRGDSP)),即RGD)阻斷LN與ASMCs之間的相互作用,分為以下五組:正?？瞻捉M,哮喘空白組,哮喘+LN組,哮喘+LN+α7抗體組,以及哮喘+LN+RG

4、D組。通過實(shí)時(shí)定量PCR和ELISA法等方法分別從mRNA水平和蛋白水平檢測ASMCs分泌TGF-β1,RANTES和GM-CSF等細(xì)胞因子的水平。
　　結(jié)果:
　　層黏連蛋白可以降低腫瘤壞死因子-α誘導(dǎo)的哮喘大鼠ASMCs細(xì)胞因子的分泌:
　　(1)哮喘+LN組中:TGF-β1,RANTES和GM-CSF的相對mRNA的量及蛋白的表達(dá)水平均低于哮喘空白組(P<0.05);而哮喘+LN組與正?？瞻捉M的細(xì)胞因子表達(dá)水平無

5、差異(P>0.05)。
　　(2)α7單克隆抗體和RGD多肽干預(yù)實(shí)驗(yàn)組中:三種細(xì)胞因子的相對mRNA的量與蛋白表達(dá)水平均高于哮喘+LN組(P<0.05),但低于哮喘空白組的表達(dá)水平(P<0.05)。
　　結(jié)論:
　　我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明ECM蛋白中的LN可以抑制TNF-α誘導(dǎo)的ASMCs分泌TGF-β1,RANTES和GM-CSF水平。α7單克隆抗體和可溶性的RGD多肽可以部分阻斷LN對ASMCs分泌TGF-β1,RAN