TNF-α對哮喘模型大鼠氣道平滑肌細胞增殖及ERK1-2活性的影響.pdf

1、目的:探討TNF—α對哮喘大鼠氣道平滑肌細胞(ASMCs)增殖及對ASMCs上ERK1/2mRNA、p—ERK1/2表達水平的影響。 方法:健康雄性Wistar大鼠，體重約250g，適應性喂養(yǎng)1周后，采用卵清白蛋白腹腔注射致敏大鼠，兩周后用卵清白蛋白霧化吸入激發(fā)。對照組以生理鹽水代替卵清白蛋白腹腔注射和霧化吸入。哮喘模型建立后，取大鼠氣道平滑肌細胞進行原代培養(yǎng)，分別以0.1μg/L、1.0μg/L、10μg/L、20μg/L T

2、NF—α干預ASMCs生長。實驗分為六組：(1)對照組、(2)模型組、(3)、(4)、(5)、(6)組分別為不同濃度的TNF—α干預組。采用流式細胞儀、四甲基偶氮唑鹽(MTT)法檢測各組ASMCs增殖情況，觀察不同濃度TNF—α對ASMCs增殖的影響。逆轉錄聚合酶鏈式反應(RT—PCR)檢測ASMCs上ERK1/2 mRNA表達，免疫細胞化學染色法檢測磷酸化ERK1/2蛋白的表達及定位。 結果:(1)模型組ASMCs S期比例

3、、A值、ERK1/2 mRNA、p—ERK1/2蛋白的表達量與對照組相比均顯著增高(均 P＜0．01)。各TNF—α干預組ASMCs的S期比例、A值、ERK1/2 mRNA表達量與模型組比較均顯著降低(均P＜0．01)，仍高于對照組(均P＜0．01)。各干預組p—ERK1/2蛋白表達量與模型組比較均顯著降低(均P＜0．01)，其中，10μg/LTNF—α干預組的p—ERK1/2蛋白表達量與對照組比較無差異(P＞0.05)；(2)各干預組

4、S期細胞所占比例與 TNF—α濃度之間呈劑量依賴關系，隨TNF—α干預濃度的增加，S期細胞所占比例逐漸減少；(3)直線相關性分析顯示，模型組ASMCs S期細胞比例與大鼠氣道平滑肌細胞上ERK1/2 mRNA和p—ERK1/2表達水平呈正相關(分別為r=0.717，r=0.854，P均＜0.05)。 結論:與正常鼠相比，慢性哮喘大鼠氣道平滑肌細胞增殖明顯，處于S期的細胞比例明顯增高。經 TNF—α干預后，慢性哮喘大鼠氣道平滑肌