瘦素通過PI3K-Akt通路對大鼠氣道平滑肌細胞凋亡的影響.pdf

1、目的：觀察大鼠氣道平滑肌細胞(ASMCs)在瘦素干預(yù)下，其蛋白激酶-B(protein kinase B，PKB/Akt)、磷酸化蛋白激酶-B(Phosphorylation Akt，Pho-Akt)、B細胞淋巴瘤/白血病-2(B-cell lymphoma/leukemia-2，Bcl-2)、Bcl-2相關(guān)x蛋白(Bcl-2-associated X protein，Bax)、半胱氨酸天冬氨酰蛋白酶-3(cysteine aspart

2、icamnonia acyl protease-3，caspase-3)的表達及細胞凋亡的變化，探討瘦素對ASMCs凋亡的影響及其可能的機制。
　　方法：體外培養(yǎng)大鼠ASMCs，實驗用第5-6代細胞，隨機分為空白對照組、瘦素50μg/L組(Lep50組)、瘦素100μg/L組(Lep100組)、瘦素200μg/L組(Lep200組)、瘦素200μg/L+LY294002組[磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)抑制劑組]。各組均孵育24小

3、時后用Annexin-V/PI雙標(biāo)記流式細胞儀分析法檢測細胞凋亡率，Westernblot測定Akt、Pho-Akt、Bcl-2、Bax、裂解的caspase-3的蛋白表達情況。
　　結(jié)果：1.瘦素對ASMCs凋亡的影響各組均孵育24h后，用Annexin-V/PI雙標(biāo)記流式細胞儀分析法檢測細胞凋亡率。Lep50組、Lep100組、Lep200組的細胞凋亡率分別為(3.97±0.39)％、(1.88±0.72)%、(0.77±0.

4、11)%均低于空白對照組的(7.38±0.49)%(均P<0.05)，且各組細胞凋亡率與瘦素濃度成負相關(guān)(r=-0.711，P<0.05)；PI3K抑制劑組細胞凋亡率為(3.29±0.36)%較Lep200組的(0.77±0.11)%升高(P<0.01)。
　　2.Bcl-2、Bax、裂解的caspase-3的蛋白表達Western blot結(jié)果顯示隨著瘦素濃度的升高Bcl-2表達增加，且與濃度成正相關(guān)(r=0.939，P<0.0

5、5)，Bax，裂解的caspase-3表達下降，與瘦素濃度成負相關(guān)(r值分別為-0.908和-0.961，均P<0.05)，Bcl-2/Bax比值增加(P<0.05)，PI3K抑制劑組與Lep200組相比Bcl-2表達下降(P<0.05)，Bax、裂解的caspase-3表達升高(均P<0.05)，Bcl-2/Bax比值降低(P<0.05)。
　　3.Akt、Pho-Akt的表達Western blot結(jié)果分析后顯示，隨著瘦素濃度