柚皮甙復合BMSCs移植治療股骨頭缺血性壞死的試驗研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:(1)探討柚皮甙能否誘導骨髓間充質(zhì)干細胞向成骨細胞方向分化。
 ?。?)探討內(nèi)臵氯化鋅致股骨頭缺血性壞死的機制及可行性。
  (3)探討柚皮甙誘導BMSCs復合同種異體松質(zhì)骨載體在兔體內(nèi)修復壞死股骨頭的作用機制。
 ?。?)為柚甙成為新藥提供理論支持。
  方法:體外實驗:以新生兔的第三代骨髓間充質(zhì)干細胞為研究對象,對其進行體外分離、培養(yǎng)、鑒定,掌握骨髓間充質(zhì)干細胞的一般生長規(guī)律及環(huán)境。隨后取同批骨髓間充質(zhì)

2、干細胞擴增至第三代后種植于12孔板,分別用柚皮甙誘導液、成骨誘導液、柚皮甙成骨誘導液誘導骨髓間充質(zhì)干細胞向成骨細胞分化,同時設立空白對照組;取成年兔髂骨脫蛋脫脂處理后,檢測其生化指標,以備用。同種體內(nèi)實驗:以2.3-2.5公斤的新西蘭大白兔為研究對象,經(jīng)股骨頸骨隧道臵6.5mg、7.5 mg的氯化鋅入股骨頭內(nèi)致缺血性壞死,待造模穩(wěn)定后。選同批號2.3-2.5公斤新西蘭大白兔21只分5mg、6.5mg、7.5 mg三組,所有動物均右側造模

3、,左側空白對照進行實驗研究,于第2、14、28、42天拍攝 x線片、處死做組織病理學切片,確定致股骨頭壞死的最佳劑量及壞死與修復的臨界點及最佳內(nèi)臵劑量。待造模成功后,選同批號2.3-2.5公斤新西蘭大白兔20只以最佳內(nèi)臵劑量為標準統(tǒng)一造模,3周后刮除壞死灶,分別植入單純松質(zhì)骨載體(對照組)、BMSCs復合松質(zhì)骨載體復合物(實驗組),空白組進行實驗研究。分別于術后第4、8、12周拍攝X線片、處死做組織病理學觀察,用SPSS18.0統(tǒng)計軟件

4、對相關項目進行統(tǒng)計學分析。
  結果:①BMSCs輪廓呈長梭形,少量細胞呈星形,胞漿豐富,常有1-2個細胞核,位臵居中成成纖維樣生長。消化傳代后,細胞透亮呈圓形,2-4小時后貼壁生長,變成短梭形,1-2天后細胞貼附于培養(yǎng)瓶底,呈長梭形分散排列??上蚨喾较蛘T導分化,經(jīng)誘導的細胞生長旺盛,形體飽滿,體積逐漸增大;柚皮甙誘導3周后,培養(yǎng)的細胞呈現(xiàn)堿性磷酸酶、鈣化結節(jié)和I性膠原免疫組織化學染色陽性反應。成骨誘導液與柚皮甙在誘導 BMSCs

5、向成骨分化方面沒有明顯的差異性(P>0.05),成骨誘導液復合柚皮甙亦無明顯的增強或減弱;
 ?、?.5mg氯化鋅在臵入1周后骨細胞開始壞死,4周時壞死的骨小梁表面及壞死骨周圍有大量新生骨形成,新生骨、壞死骨相混雜,新生骨內(nèi)細胞胞漿豐富,胞核大,說明其代謝非?;钴S。比較符合人類股骨頭壞死的病理過程;
  ③支架材料三維孔隙結構保留完好,材料的孔徑約為300μm,孔隙率約為82.3%。具有原始骨組織的三維結構,為細胞的的生長提

6、供了一個利于細胞黏附、增殖、分化及誘導的正常表達場所。BMSCs不僅能與生物骨衍生支架黏附,而且能在支架上分裂、增殖,體現(xiàn)了良好的生物相容性和細胞-材料界面作用。
  ④植入支架材料8周后周邊新骨帶明顯增寬,成骨反應向中心部推進,植入物表面有大量骨痂形成,與骨端連接緊密,少部分標本形成連續(xù)性骨橋。12周,部分充填區(qū)被幼稚的骨小梁所占據(jù),部分充填區(qū)廣布相對成熟的骨小梁,但較正常骨小梁粗、排列不夠規(guī)則,骨痂形成,可見植入物完全骨化,缺

7、損區(qū)完全被新骨代替。
  結論:①BMSCs在不同的誘導劑作用下,可向成骨細胞、軟骨細胞、脂肪細胞分化。在向成骨細胞分化的過程中,分化的細胞富含堿性磷酸酶,能合成Ⅰ型膠原表達素和骨橋蛋白,并可形成鈣化結節(jié)。
 ?、诼然\在腔室內(nèi)溶解,能夠殺滅滲透區(qū)域內(nèi)的成骨細胞及骨髓細胞,可造成一定區(qū)域的骨壞死,再現(xiàn)股骨頭壞死后的一系列病理生理過程,可造一定區(qū)域性骨壞死病理模型。
  ③備的同種異體脫蛋白、脫脂松質(zhì)骨載體,材料來源廣泛

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