柚皮甙復合BMSCs移植治療股骨頭缺血性壞死的試驗研究.pdf

1、目的：（1）探討柚皮甙能否誘導骨髓間充質(zhì)干細胞向成骨細胞方向分化。
　?。?）探討內(nèi)臵氯化鋅致股骨頭缺血性壞死的機制及可行性。
　　（3）探討柚皮甙誘導BMSCs復合同種異體松質(zhì)骨載體在兔體內(nèi)修復壞死股骨頭的作用機制。
　?。?）為柚甙成為新藥提供理論支持。
　　方法：體外實驗：以新生兔的第三代骨髓間充質(zhì)干細胞為研究對象，對其進行體外分離、培養(yǎng)、鑒定,掌握骨髓間充質(zhì)干細胞的一般生長規(guī)律及環(huán)境。隨后取同批骨髓間充質(zhì)

2、干細胞擴增至第三代后種植于12孔板，分別用柚皮甙誘導液、成骨誘導液、柚皮甙成骨誘導液誘導骨髓間充質(zhì)干細胞向成骨細胞分化，同時設立空白對照組；取成年兔髂骨脫蛋脫脂處理后，檢測其生化指標，以備用。同種體內(nèi)實驗：以2.3-2.5公斤的新西蘭大白兔為研究對象，經(jīng)股骨頸骨隧道臵6.5mg、7.5 mg的氯化鋅入股骨頭內(nèi)致缺血性壞死，待造模穩(wěn)定后。選同批號2.3-2.5公斤新西蘭大白兔21只分5mg、6.5mg、7.5 mg三組，所有動物均右側造模

3、，左側空白對照進行實驗研究，于第2、14、28、42天拍攝 x線片、處死做組織病理學切片，確定致股骨頭壞死的最佳劑量及壞死與修復的臨界點及最佳內(nèi)臵劑量。待造模成功后，選同批號2.3-2.5公斤新西蘭大白兔20只以最佳內(nèi)臵劑量為標準統(tǒng)一造模，3周后刮除壞死灶，分別植入單純松質(zhì)骨載體（對照組）、BMSCs復合松質(zhì)骨載體復合物（實驗組），空白組進行實驗研究。分別于術后第4、8、12周拍攝X線片、處死做組織病理學觀察，用SPSS18.0統(tǒng)計軟件

4、對相關項目進行統(tǒng)計學分析。
　　結果：①BMSCs輪廓呈長梭形，少量細胞呈星形，胞漿豐富，常有1-2個細胞核，位臵居中成成纖維樣生長。消化傳代后，細胞透亮呈圓形，2-4小時后貼壁生長，變成短梭形，1-2天后細胞貼附于培養(yǎng)瓶底，呈長梭形分散排列?？上蚨喾较蛘T導分化，經(jīng)誘導的細胞生長旺盛，形體飽滿，體積逐漸增大；柚皮甙誘導3周后，培養(yǎng)的細胞呈現(xiàn)堿性磷酸酶、鈣化結節(jié)和I性膠原免疫組織化學染色陽性反應。成骨誘導液與柚皮甙在誘導 BMSCs

5、向成骨分化方面沒有明顯的差異性（P>0.05)，成骨誘導液復合柚皮甙亦無明顯的增強或減弱；
　?、?.5mg氯化鋅在臵入1周后骨細胞開始壞死，4周時壞死的骨小梁表面及壞死骨周圍有大量新生骨形成，新生骨、壞死骨相混雜，新生骨內(nèi)細胞胞漿豐富，胞核大，說明其代謝非?；钴S。比較符合人類股骨頭壞死的病理過程；
　　③支架材料三維孔隙結構保留完好,材料的孔徑約為300μm，孔隙率約為82.3％。具有原始骨組織的三維結構，為細胞的的生長提

6、供了一個利于細胞黏附、增殖、分化及誘導的正常表達場所。BMSCs不僅能與生物骨衍生支架黏附，而且能在支架上分裂、增殖，體現(xiàn)了良好的生物相容性和細胞-材料界面作用。
　　④植入支架材料8周后周邊新骨帶明顯增寬，成骨反應向中心部推進，植入物表面有大量骨痂形成，與骨端連接緊密，少部分標本形成連續(xù)性骨橋。12周，部分充填區(qū)被幼稚的骨小梁所占據(jù)，部分充填區(qū)廣布相對成熟的骨小梁，但較正常骨小梁粗、排列不夠規(guī)則，骨痂形成，可見植入物完全骨化，缺

7、損區(qū)完全被新骨代替。
　　結論：①BMSCs在不同的誘導劑作用下，可向成骨細胞、軟骨細胞、脂肪細胞分化。在向成骨細胞分化的過程中，分化的細胞富含堿性磷酸酶，能合成Ⅰ型膠原表達素和骨橋蛋白，并可形成鈣化結節(jié)。
　?、诼然\在腔室內(nèi)溶解，能夠殺滅滲透區(qū)域內(nèi)的成骨細胞及骨髓細胞，可造成一定區(qū)域的骨壞死，再現(xiàn)股骨頭壞死后的一系列病理生理過程，可造一定區(qū)域性骨壞死病理模型。
　　③備的同種異體脫蛋白、脫脂松質(zhì)骨載體，材料來源廣泛