自噬因子Beclin1及MAP1LC3在喉鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)及意義.pdf

1、目的:喉是人類發(fā)音的基礎(chǔ),又是呼吸道的門(mén)戶。隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)及環(huán)境的變化,喉癌的發(fā)病率明顯升高。據(jù)北美及歐洲流行病學(xué)研究顯示其發(fā)病率為7.0-16.2/10萬(wàn)人,我國(guó)部分省市的發(fā)病率為1.5-3.4/10萬(wàn)人。1983年-1992年我國(guó)13個(gè)省市部分醫(yī)院惡性腫瘤就診患者中,喉癌占頭頸腫瘤的13.9％,占全身惡性腫瘤的2.1％。喉癌的發(fā)病有種族和地區(qū)差異,在20世紀(jì)80年代中期通過(guò)對(duì)160個(gè)地區(qū)的人口調(diào)查得知,全世界喉癌發(fā)病率最高的國(guó)家為西班

2、牙,法國(guó),意大利和波蘭。我國(guó)華北和東北地區(qū)發(fā)病率遠(yuǎn)高于江南各省。喉癌男性多于女性,為8:1,以40歲-60歲多見(jiàn)。喉部惡性腫瘤中96％-98％為鱗狀細(xì)胞癌。和其他惡性腫瘤一樣,喉癌的治療手段包括手術(shù)、放療、化療及免疫治療等等,但隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展,基因治療已成為一種新的治療手段。近年來(lái),被大多數(shù)學(xué)者接受的是將程序性細(xì)胞死亡分為凋亡性程序性細(xì)胞死亡和自噬性程序性細(xì)胞死亡。自噬除了發(fā)揮細(xì)胞死亡的作用,在維持細(xì)胞生命中的作用不可忽視。自噬現(xiàn)象

3、最早是Ashford和Porten于1962年用電子顯微鏡在人的肝細(xì)胞中觀察到的。它被認(rèn)為是一種細(xì)胞反應(yīng),用來(lái)自身獲得營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)及消化細(xì)胞器。但直到近10年,隨著酵母模型的建立和基因技術(shù)的發(fā)展,人們對(duì)自噬分子的機(jī)制和形態(tài)特點(diǎn)的了解才逐漸深入,它是能夠直接導(dǎo)致細(xì)胞存活或者死亡的工具。自噬的缺陷會(huì)導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。哺乳動(dòng)物自噬相關(guān)基因己由最初的Atg/Apg/Aut/Cut,統(tǒng)一命名為Atg。Beclin1,最原始是作為一種新型的與Bcl-2相

4、互作用的蛋白被鑒定的,分子量為60KDa。它是哺乳動(dòng)物自噬基因Atg6的同源基因,位于人類基因腫瘤的易感部位,第17號(hào)染色體上,在許多乳房,前列腺,卵巢腫瘤中,此染色體上都有單等位基因的缺失。由于它能夠誘導(dǎo)細(xì)胞自噬性死亡,可成為治療腫瘤的新方法。但是在細(xì)胞中,對(duì)于Beclin1發(fā)揮作用的分子機(jī)制,我們的認(rèn)識(shí)是非常貧乏的。MAP1LC3是酵母Atg8的同源物,是在高等真核細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)的第一種自噬體膜蛋白,被鑒定是自噬溶酶體最基本的組成成分。

5、MAP1LC3有分子量分別為18,16KDa兩種形式,是由翻譯后的修飾不同造成的。它可定位于前自噬泡,自噬泡膜和自噬體。近年來(lái)三種MAP1LC3的亞型已被克隆,分別是MAP1LC3A,B,C。它們是新型的自噬體標(biāo)記。本實(shí)驗(yàn)探討B(tài)eclin1與MAP1LC3因子在喉鱗狀細(xì)胞癌組織和癌旁組織中的表達(dá)情況、兩個(gè)因子分別在喉鱗狀細(xì)胞癌不同病理分級(jí)、臨床分期、不同部位、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等情況下的表達(dá)及兩個(gè)因子有無(wú)相關(guān)性。為將自噬的知識(shí)應(yīng)用到喉癌的診

6、斷和治療當(dāng)中提供理論依據(jù)。
　　 方法:選取49例喉鱗癌組織和30例癌旁組織。首先經(jīng)過(guò)HE染色確定喉鱗癌組織和癌旁組織。然后采用免疫組織化學(xué)的方法檢測(cè)自噬基因Beclin1和MAP1LC3分別在喉癌組織和癌旁組織當(dāng)中的表達(dá)。檢測(cè)這兩個(gè)因子在喉鱗狀細(xì)胞癌不同病理分級(jí)、臨床分期、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及腫瘤發(fā)生部位等臨床特征方面的表達(dá)。同時(shí)檢測(cè)這兩個(gè)指標(biāo)在喉癌組織表達(dá)的相關(guān)性。將統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。對(duì)Beclin1,

7、MAP1LC3兩者在鱗癌組織和癌旁組織中的表達(dá),分別在病理分級(jí),臨床分期,有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及發(fā)生部位等特征方面的表達(dá)均采用X2檢驗(yàn);兩指標(biāo)的相關(guān)性研究用Spearman等級(jí)相關(guān)檢驗(yàn),P＜0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果:1 Beclin1在喉鱗狀細(xì)胞癌組織,癌旁組織中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為24.49％,100％。MAP1LC3在兩者的陽(yáng)性表達(dá)率分別為18.37％,90％。兩者在癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率都明顯低于癌旁組織,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P

8、＜0.05)。
　　 2 Beclin1在高分化鱗狀細(xì)胞癌中的陽(yáng)性表達(dá)率為28.57％,在中低分化中的陽(yáng)性表達(dá)率為14.29％。MAP1LC3在高分化及中低分化鱗狀細(xì)胞癌中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為22.86％,7.14％。兩指標(biāo)分別在兩組間的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 3有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的鱗癌組織和無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的鱗癌組織中Beclin1的陽(yáng)性表達(dá)率分別為4.34％,42.31％,兩組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)

9、。MAP1LC3的陽(yáng)性表達(dá)率分別為0％,34.62％,兩組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 4Ⅰ-Ⅱ期喉癌組織中Beclin1的陽(yáng)性表達(dá)率為31.03％,Ⅲ-Ⅳ期的陽(yáng)性表達(dá)率為15％,兩組間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。Ⅰ-Ⅱ期喉癌組織中MAP1LC3的陽(yáng)性表達(dá)率為20.69％,Ⅲ-Ⅳ期的陽(yáng)性表達(dá)率為15％,兩組間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 5 Beclin1在聲門(mén)上型喉癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為2

10、6.92％,在聲門(mén)型中的陽(yáng)性表達(dá)率為21.74％,兩組間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。MAP1LC3在聲門(mén)上型喉癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為15.38％,在聲門(mén)型中的陽(yáng)性表達(dá)率為21.74％,兩組間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 6 Beclin1和MAP1LC3在喉鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)無(wú)相關(guān)性(P＞0.05)。
　　 結(jié)論:1 Beclin1在喉鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)下調(diào),明顯低于癌旁組織;有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的喉癌組織中的