青海地方核桃種質(zhì)資源遺傳多樣性研究.pdf

1、本研究通過(guò)對(duì)青海省核桃主要六大產(chǎn)區(qū)（民和縣，循化縣，尖扎縣，化隆縣，樂(lè)都區(qū)，貴德縣）的核桃種質(zhì)資源進(jìn)行調(diào)查，共選擇了211份核桃單株作為研究對(duì)象，測(cè)定了核桃主要經(jīng)濟(jì)性狀指標(biāo)，包括：脂肪含量、蛋白質(zhì)含量、主要脂肪酸含量和氨基酸含量，以及DNA遺傳標(biāo)記，分析了不同產(chǎn)區(qū)核桃間的差異性。本研究主要內(nèi)容包括：
　?、艑?duì)六個(gè)產(chǎn)區(qū)核桃的主要經(jīng)濟(jì)性狀指標(biāo)的分析表明，不同產(chǎn)區(qū)核桃的內(nèi)含物含量差異較大，多樣性豐富。核桃仁中脂肪含量的變化范圍介于31.

2、21％～70.80％之間，平均為61.92％，脂肪含量的變異系數(shù)為9.69％，單不飽和脂肪酸（油酸）含量變化范圍為7.14％～51.91％，多不飽和脂肪酸（亞油酸，亞麻酸）含量變化范圍為41.93％～84.24％之間，不飽和脂肪酸含量變化范圍為88.22％～95.56％。蛋白質(zhì)含量的變化范圍介于10.02％～25.23％之間，平均為16.94％，蛋白質(zhì)含量的變異系數(shù)為14.76％；氨基酸總含量的變化范圍介于11.1453％～28.542

3、3％之間，平均含量17.4518％，變異系數(shù)較小，變異范圍在4.8296～6.3852％之間，平均變異系數(shù)為5.6582％。不同種類(lèi)氨基酸的含量差異明顯，在0.4802％～3.7614％之間，平均含量1.1635％，變異系數(shù)較大，變異范圍在14.5814％～26.3897％之間，平均變異系數(shù)為18.0956％。
　?、扑崛』蚪MDNA的OD260/OD280值在1.72～1.97之間，濃度在120ng/μL～580ng/μL之間

4、，質(zhì)量良好。通過(guò)正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，分散體系中，影響PCR反應(yīng)的5個(gè)因素最佳水平為：0.35mmol·L-1dNTP、0.5umol·L-1Primer、1.75mmol·L-1Mg2+、0.75UTaq Polymerase和80ngDNA。預(yù)混體系中，10μLISSR-PCR最佳反應(yīng)體系為：5μL2×Taq PCRMasterMix、1.5umol·L-1Primer、100 ng DNA和1.5μLH2O。篩選出的12條ISSR引物擴(kuò)增

5、條帶主要集中在100～2000bp之間，條帶數(shù)量從11～19條不等，共產(chǎn)生167條譜帶，平均為13.92條。其中多態(tài)性譜帶127條，平均多態(tài)性比率76.05％。ISSR-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示：供試材料居群平均水平上的多樣性指數(shù)為：多態(tài)性位點(diǎn)（NP）為100.67個(gè)、多態(tài)性位點(diǎn)百分率（PPL）達(dá)60.28％、等位基因數(shù)（A）為1.6028、有效等位基因數(shù)（Ae）為1.3665、遺傳多樣度指數(shù)（H）為0.2156、香農(nóng)指數(shù)（I）為0.3223

6、。有效等位基因數(shù)（Ae）介于1.3456～1.4028；遺傳多樣度指數(shù)（H）變動(dòng)范圍為0.2071～0.2377。物種水平上的多樣性指數(shù)為：多態(tài)性位點(diǎn)（NP）為127個(gè)、多態(tài)性位點(diǎn)百分率（PPL）達(dá)76.05％、等位基因數(shù)（A）為1.7605、有效等位基因數(shù)（Ae）為1.3866、遺傳多樣度指數(shù)（H）為0.2339、香農(nóng)指數(shù)（I）為0.3585。采用POPGENE32軟件計(jì)算得出居群總遺傳變異（Ht）為0.2350，居群內(nèi)遺傳變異（Hs

7、）為0.2156，遺傳分化系數(shù)（Gst）為0.0826，表明有8.26％的遺傳分化存在于居群之間，有91.74％的遺傳分化存在于居群之內(nèi)，說(shuō)明了核桃居群之內(nèi)的遺傳分化高于居群之間。供試核桃的基因流（Nm）為5.5527，表明供試核桃居群間存在較大的基因交流。居群間和居群內(nèi)的差異均極顯著（P<0.001）。根據(jù) Nei（1978）的方法計(jì)算居群的遺傳距離在0.0154（XH和 MH）～0.0414（MH和JZ）之間，平均值為0.0257。

8、利用核桃的遺傳一致度進(jìn)行UPGMA聚類(lèi)分析，當(dāng)遺傳一致度在0.98時(shí)6個(gè)居群可分為3大類(lèi)，第一類(lèi)為循化和民和；第二類(lèi)包括尖扎和化隆；貴德和樂(lè)都聚為第三類(lèi)，其中循化和民和遺傳距離較近。12條引物將211份核桃單株完全分開(kāi)，相似系數(shù)在0.6048～0.9521之間，平均為0.8023。利用UPGMA聚類(lèi)法對(duì)青海地方核桃六個(gè)居群的211株樣品進(jìn)行聚類(lèi)分析，當(dāng)閾值為0.76時(shí)可將211個(gè)品種單株分成3個(gè)大類(lèi)。通過(guò)Cophenetic Corre