人頰脂墊與傳統吸脂術脂肪干細胞生物學特性比較.pdf

1、目的:
　　對不同來源的人脂肪干細胞(ASCs)進行體外增殖培養(yǎng)，對比其多種細胞生物學特征及增殖潛能。對人ASCs進行體外成骨分化誘導培養(yǎng)，對比研究兩種來源的ASCs成骨活性的差異。探討頰脂墊作為潛在的富含ASCs的供體，在骨組織工程領域，尤其是應用骨組織工程技術在口腔頜面外科骨缺損修復中的應用價值。
　　材料與方法:
　　無菌條件下分別提取新鮮的超聲乳化負壓吸脂術所得腹部皮下脂肪和面部輪廓整形手術切取人頰脂墊脂肪各1

2、0ml，Ⅰ型膠原酶消化，離心后提取ASCs，原代培養(yǎng)14天時，對兩組細胞進行消化，計數，此后每3天換液一次，達80％融合時傳代。分別取兩種來源生長良好的第5代ASCs，通過CCK-8試劑盒操作要求測定兩組ASCs的增殖指數，以此檢測兩組ASCs增殖潛能的差別；并對其進行成骨培養(yǎng)，分別于3、7、14天，利用堿性磷酸酶試劑盒操作要求測定兩組細胞的堿性磷酸酶活性，并從成骨培養(yǎng)第1天開始，連續(xù)7天測量其增殖指數，比較兩組ASCs在經過成骨培養(yǎng)后

3、其增殖潛能和成骨潛能有何差異。
　　數據均由作者采用SPSS13.0軟件進行分析，以P<0.05為差異有顯著性意義。
　　結果:
　　1、人頰脂墊為特化脂肪組織，血管成分明顯多于皮下脂肪。頰脂墊提取ASCs密度為(8.77±1.28)×104/ml，顯著高于吸脂術來源者(6.00±0.47)×104/ml；ASCs種植入培養(yǎng)瓶中48h滯留期后可見少量的梭形細胞貼壁，細胞形態(tài)不一，核居中。從第3天開始，進入增殖期快速期，

4、細胞培養(yǎng)至第7天，可見細胞以集落或散在的方式增長，兩個不同部位的ASCs形態(tài)差異較小，均以梭形和多角型為主，但頰脂墊部位ASCs形態(tài)更加均一。細胞培養(yǎng)至第3代，開始表現快速增殖，頰脂墊來源ASCs形態(tài)較吸脂術來源者，形態(tài)更加均一且增殖更快。ASCs逐漸長滿瓶壁，經傳代培養(yǎng)逐漸轉變?yōu)榫坏亩噙呅巍?br>　　2、不同來源ASCs，其表面標志CD44均呈陽性表達，造血干細胞的標志CD34均呈陰性表達，結果顯示，ASCs具有間充質干細胞的表型

5、特征。
　　3、經成骨培養(yǎng)后，ASCs的增殖速度較未成骨培養(yǎng)前明顯減慢，經成骨誘導后的兩組ASCs相比，在前3天，誘導后的ASCs的增殖速度與未誘導時ASCs差異不大；4-7天時，頰脂墊部位成骨誘導的ASCs的增殖速度顯著快于吸脂術來源的ASCs成骨誘導后的增殖速度。且P<0.05，兩者有統計學差異。
　　4、人不同部位ASCs成骨培養(yǎng)3天后，堿性磷酸酶活性頰脂墊組為15.8±1.25u/100ml，吸脂術組為9.43±1.

6、65u/100ml，ASCs成骨培養(yǎng)7天后，堿性磷酸酶活性頰脂墊組為33.84±7.44u/100ml，吸脂術組為18.66±3.70u/100ml，成骨培養(yǎng)14天時，堿性磷酸酶活性頰脂墊組為61.56±5.43u/100ml，吸脂術組為45.03±4.56u/100ml，所有結果經t檢驗，均具有統計學差異(P<0.05)。
　　結論:
　　1、人頰脂墊部位來源的ASCs相比吸脂術來源的ASCs，單位體積組織內可提取的AGC