涎腺腺樣囊性癌腫瘤干細胞生物學特性初探.pdf

1、惡性腫瘤是目前危害人類健康的重要疾病之一，其發(fā)病及轉移機制是醫(yī)學家們正努力研究的課題方向，也直接關系到腫瘤的防治策略。近年來腫瘤干細胞學說的提出為我們重新認識腫瘤的本質(zhì)與起源，以及臨床腫瘤治療的研究提供了新的思考方向。 目的:對腺樣囊性癌肺高轉移細胞株(adenoid cystic carcinoma cell cloneshighly metastatic to the lung ACC-M)中不同表型的腫瘤亞群細胞的細胞膜抗

2、原表達的差異性進行研究和分析，為今后進一步分離腫瘤干細胞打下一定的實驗基礎。 方法:①采用單細胞體外培養(yǎng)的方法了解ACC-M的分裂和增殖的特點，以探討腫瘤干細胞存在的可能性。②利用MTT比色試驗法繪制ACC-M的生長曲線③利用流式細胞儀(flow cytometry FCM)檢測ACC-M腫瘤細胞的表面抗原cD24、CD44、ABCG2的表達情況。④采用免疫組化的方法檢測單細胞體外培養(yǎng)具有增殖能力的ACC-M腫瘤細胞與常規(guī)體外傳

3、代培養(yǎng)的ACC-M腫瘤細胞的CD44、CD24和MMP-9表達差異度。 結果:①在單細胞體外培養(yǎng)6d后，ACC-M單細胞僅有8.62％持續(xù)分裂、增殖,而并非全部的細胞都發(fā)生分裂。②ACC-M的生長曲線顯示細胞的倍增時間接近48小時。③免疫組化結果顯示，單細胞體外培養(yǎng)具有增殖能力的ACC-M細胞與常規(guī)傳代培養(yǎng)的ACC-M細胞相比，兩者在CD24、CD44和MMP-9的表達上無統(tǒng)計學上的差異，CD44和MMP-9在ACC-M細胞中陽

4、性表達率很高，CD24在ACC-M細胞中陽性表達率較低。④FcM檢測結果顯示，ACC-M細胞表面CD44<'+>,ABCG2<'+>和CD44<'+>CD24<'->的表達率分別為90.67％、8.64％和78.09％。 結論: ①OACC-M腫瘤細胞具有異質(zhì)性，并不是所有的ACC-M細胞都能克隆增殖，只有一小部分細胞能不斷地分裂增殖，大多數(shù)細胞最終死亡或凋亡。 ②單細胞體外培養(yǎng)具有增殖能力的ACC-M細胞與常規(guī)

5、傳代培養(yǎng)的ACC-M細胞相比，CD44,CD24和MMP-9的表達無顯著的增加或降低，因而對于分離ACC-M的腫瘤干細胞，CD44、CD24和MMP-9缺乏特異性。CD44和MMP-9與腫瘤的高轉移性密切相關。轉移潛能高的涎腺腺樣囊性癌細胞具有較強的基質(zhì)金屬蛋白酶分泌。 ③Acc-M也象某些實體瘤一樣含有側群細胞(Side population SP)。在后續(xù)的研究中，可考慮利用SP細胞的表型標記“ABCG2”，用FCM或磁珠分