SDF-1α-CXCR4對THP-1細胞遷移及其與血管平滑肌細胞黏附的影響.pdf

1、趨化因子SDF-1α及其受體CXCR4在胚胎發(fā)育、腫瘤細胞轉移及介導免疫缺陷病毒(HIV)感染中發(fā)揮重要作用,最近又在動脈粥樣硬化斑塊中發(fā)現(xiàn)SDF-1α高表達,SDF-1α/CXCR4與動脈粥樣硬化的關系已經(jīng)引起重視。
　　本研究首先探討 SDF-1α對單核細胞的趨化作用,然后在 Ox-LDL處理的血管平滑肌細胞和單核細胞上對 SDF-1α/CXCR4的表達進行研究,最后對SDF-1α/CXCR4在單核細胞/血管平滑肌細胞黏附的作

2、用進行研究。
　　目的:探討SDF-1α對單核細胞趨化作用及其Ox-LDL、苦瓜蛋白對SDF-1α趨化單核細胞的影響;Ox-LDL對THP-1細胞CXCR4、rVSMC的SDF-1α表達的影響;SDF-1α/CXCR4對THP-1/rVSMC黏附的影響。
　　方法:用小室遷移試驗來研究 SDF-1α對單核細胞的趨化作用,將單核細胞或經(jīng)Ox-LDL處理的單核細胞加入上室,在上、下室分別加入苦瓜蛋白、SDF-1α孵育10小時后計

3、數(shù)各組下室遷移的細胞數(shù)。RT-PCR檢測 CXCR4或 SDF-1αmRNA的表達,Western blot檢測其蛋白表達變化,觀察ox-LDL對THP-1細胞CXCR4、rVSMC的SDF-1α表達的劑量和時間效應。用免疫組化檢測SDF-1α在頸總動脈套環(huán)兔模型中的表達變化。用靜態(tài)黏附實驗來研究THP-1/rSMC的黏附,原代培養(yǎng)的rVSMC與50μg/ml Ox-LDL孵育48h,將單核細胞與平滑肌細胞共孵育后洗脫檢測黏附作用,并加

4、用SDF-1α抗體阻斷。
　　結果:SDF-1α呈濃度依賴性誘導單核細胞的遷移,加入CXCR4抗體可明顯抑制這種作用。經(jīng)不同濃度Ox-LDL處理48h后的THP-1細胞再用10ng/ml SDF-1α進行趨化時,結果發(fā)現(xiàn) Ox-LDL呈濃度依賴性的增加單核細胞的遷移,50μg/ml Ox-LDL組所遷移的細胞數(shù)是對照組的11倍?？喙系鞍讋t呈濃度依賴性的抑制單核細胞的遷移。THP-1細胞有基礎水平的CXCR4表達,50μg/ml O

5、x-LDL可使CXCR4的表達上調4-5倍。CXCR4上調最早在6小時內發(fā)生,12小時達峰。培養(yǎng)的rVSMC亦有基礎水平的SDF-1α表達,且在0-50μg/ml范圍內,Ox-LDL呈濃度依賴性的上調SDF-1α表達,50μg/ml可使SDF-1α上調約5倍;經(jīng)50μg/ml ox-LDL刺激0-48h,12h出現(xiàn)小峰,隨后逐漸下降,但48h再度增高。Ox-LDL呈濃度依賴性的增加 THP-1/rVSMC的黏附,50μg/ml Ox-L